ГОСТ 16445-78 С. 3
3.4. О п р е д е л е н и е с т е р и л ь н о с т и
3.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
термостат с температурой нагрева 37—38 *С;
автоклав:
пипетки вместимостью 10 см3;
пипетки пастеровские;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
воронки стеклянные:
пробки ватно-марлевые;
фильтры бумажные;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805;
агар микробиологический по ГОСТ 17206;
вазелин медицинский по ГОСТ 3582.
3.4.2. Подготовка к испытанию
Готовят в соответствии с действующей рецептурой мясопептоиный бульон (МПБ). отвечаю
щий требованиям ГОСТ 20730, мясопептоиный агар (МПА) и мясопептонно-печеночный бульон
(МППБ) под вазелиновым маслом и среду Сабуро. Среды разливают по 8—10 см3 в
пробирки,
закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в
течение 30 мин при 0.15 МПа.
3.4.1. 3.4.2. (Измененная редакция, Изм. 1).
3.4.3. Проведение испытания
Посев производят из трех ампул, используя по две пробирки каждой среды на одну ампулу
гемолизина. Для этого содержимое ампулы над пламенем горелки предварительно вносят в
пробирку с мясопептонным бульоном, тщательно перемешивают и затем рассевают по остальным
пробиркам со средами. Посевы на МПБ. МПА. МППБ выдерживают в термостате при 37—38 "С, а
на среде Сабуро —при 20—22 ‘С в течение 10 суг.
3.4.4. Обработка результатов
Среды в пробирках должны оставаться стерильными.
3.5. О п р е д е л е н и е а к т и в н о с т и (титра) и б е з в р е д н о с т и
Активность гемолитической сыворотки определяют по 100 %-ному гемолизу эритроцитов
барана в гемолитической системе. Титрация гемолизина производится комплементом с титром
0.19—0.25 по ГОСТ 16446 в гемолитической системе.
Под титром гемолитической сыворотки следует понимать наименьшее количество его (наи
большее разведение), при котором в течение 10 мин при 37—38 *Снаступает полный (100 %-ный)
гемолиз 0,5 см5 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0.5 см3 комплемента в
разведении 1:20 в общем объеме жидкости 2,5 см3.
Безвредность гемолитической сыворотки характеризуется полным отсутствием гемолиза эрит
роцитов барана в пробирке без комплемента.
3.5.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
штативы;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
стаканы лабораторные, колбы по ГОСТ 25336;
колбы мерные вместимостью 100. 500 и 1000 см3по ГОСТ 1770;
пипетки вместимостью до 10 см3с ценой деления 0,1 см3 по ГОСТ 29227;
пипетки вместимостью I см3с ценой деления 0,01 см3;
баню водяную;
карандаши восковые;
физиологический раствор pH 6,8—7,2.
3.5, 3.5.1. (Измененная редакция, Изм. № 1).
3.5.2. Подготовка к испытанию
3.5.2.1. Приготовление разведений гемолитической сыворотки.
Готовят основное разведение гемолитической сыворотки 1:100, для чего берут 0.1 см3гемоли
тической сыворотки и 9.9 см3физиологического раствора.
Из основного разведения сыворотки (1:100) готовят разведения от 1:500до 1:2000. как указано
в табл. 2.