С. 4 ГОСТ 28560-90
3.2.10. Среда для определения декарбоксилазы орнитина:
в I дм-’ дистиллированной воды растворяют при нагревании 5,0 г /.-орнитина или 10.0 г
Ш.-орнитнна. 15,0 см5дрожжевого экстракта, 1.0 г глюкозы. 1.2 см’ раствора бромкрезолового пур
пурного, приготовленного по п. 3.1.12. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерили
зации он составлял при 25 ‘С (6.8 ± 0,1). Среду разливают в пробирки по 5 см’ и стерилизуют
при (121 ± I) *Св течение 10 мин. Хранят при (4 ± 2) *С не более 7 сут. Готовая среда светло-
фиолетового цвета.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так.
чтобы можно было определить предполагаемое минимальное количество продукта, содержащее бакте
рии родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus
mirabilis.
4.2. Из продукта и (или) соответствующих разведений высевают по 1,0 см’ в жидкую селектив
ную среду по п. 3.2.3. Посевы инкубируют при (36 ± 1) *С втечение 48 ч.
4.3. Положительными считают пробирки, в которых наблюдается помутнение среды. При росте
бактерий, расщепляющих мочевину, наблюдается изменение цвета среды всиний. Отсутствие измене
ния цвета среды не является показателем отсутствия роста выявляемых бактерий.
4.4. Для подтверждения присутствия бактерий родов Proteus и (или) Morganella, и (или)
Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus mirabilis из всех пробирок, в которых наблюдается
помутнение среды, делают пересевы на одну из дифференциально-диагностических плотных сред,
приготовленных по п. 3.2.4 или по п. 3.2.8, таким образом, чтобы получить рост изолированных
колоний.
Посевы инкубируют при (36 ± 1) "С в течение 48 ч.
4.5. На дифференциально-диагностических плотных средах бактерии образуют колонии круглой
формыдиаметром 1—3 мм. Бактерии рода Proteus обладают свойством роения (ползучим ростом).
4.6. Из всех чашек с характерным ростом выбирают не менее 5 колоний для выделения чистых
культур и дальнейшего изучения.
Для получения чистых культур используют скошенный в пробирке мясо-пептонный агар по
п. 3.2.1 или мясо-пептонный бульон по п. 3.2.2. Посевы инкубируют при (36 ± I) С в течение 24 ч.
4.7. Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных микроорганизмов кбактериям
родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia.
4.7.1. Для определения наличия дезаминазы фенилаланина из 24-часовой культуры по п. 4.6
делают высев штрихами на поверхность скошенного в пробирке агара, приготовленного поп. 3.2.6. и
культивируют при (36 ± I) *С в течение 48 ч, после этого на поверхность агара пипеткой наносят 3—5
капель раствора хлорного железа, приготовленного по п. 3.1.4. При этом появление интенсивной зеленой
окраски среды свидетельствует о положительной реакции. При отрицательной реакции цвет среды не
меняется.
Бактерии родов Proteus. Morganella. Providencia дают положительную реакцию.
4.7.2. Для определения способности образовывать сероводород культуры по п. 4.6 высевают
методом укола в столбик и штрихами по поверхности агаризованной среды, приготовленной по п.
3.2.5.
Посевы инкубируют при (36 ± 1) "С втечение 48 ч. При образовании сероводорода столбик среды
чернеет. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом встолбике среды появляется газ, что
указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа.
Допускается инкубирование посевов при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжатьдо 4 сут.
так как P.myxofaciens может образовывать сероводород на 3-и - 4-е сутки. Бактерии рода Morganella и
Providencia сероводорода не образуют.
4.7.3. Для определения способности утилизировать цитрат культуры, не образующие сероводород
по п. 4.7.2. пересевают на поверхность скошенного агара, приготоаленного по п. 3.2.7. Посевы инкуби
руют при (36 ± 1) "С в течение 48 ч. Окрашивание среды в синий цвет - положительная
реакция, отсутствие изменения—отрицательная реакция.
Providencia утилизируют цитрат, бактерии рода Morganella не утилизируют
Бактерии рода
цитрат.
80