ГОСТ 25311-82 С. 4
3.2. П р и г о т о в л е н и е и с п ы т у е м о й взвеси и р а з в е д е н и й
От обшей пробы отвешивают на лабораторных весах навеску массой 50 г и помешают ее в
стерильную колбу или стакан гомогенизатора, содержащий 450 см3стерильного физиологического
раствора, и тщательно перемешивают в течение 30 мин, получая основное десятикратное разведение.
После отстаивания в течение 10—15 мин из надосадочного слоя берут пипеткой 1 см3 жидкости,
вносят в пробирку с 9 см3 стерильного физиологического раствора и получают последующее
разведение. Из этой пробирки готовят последующие разведения (тысячекратное и т.д.).
4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
4.1. О п р е д е л е н и е о б щ е г о к о л и ч е с т в а м и к р о б о в в I г муки
4.1.1. Метод основан па способности живых бактериальных клеток образовывать макроколо
нии при оптимальных условиях культивирования на питательных средах.
4.1.2. По 1см3каждогоразведения вносят в стерильные бактериологические чашки и заливают
10—15 см3 стерильного, расшгааленного и охлажденного до 45 *С мясо-пептонного агара. После
застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре (30.0±0,5) "С на
72 ч.
(Измененная редакция, Изм. .\ь 1).
4.1.3. Обработка результатов
Выросшие на чашках колонии подсчитывают, умножают на кратность соответствующего
разведения. За общее количество микроорганизмов в 1г муки принимают среднее арифметическое
результатов двух смежных разведений.
4.2. О п р е д е л е н и е п р и с у т с т в и я б ак т е р и й группы к и ш е ч н о й п а л о ч к и
4.2.1. Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки расщеплять маннит
илактозу, образовывать на средах «ХБ» и Хейфеца кислые продукты, изменяющие цвет индикаторов,
входящих в состав этих сред.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
4.2.2. По I см3каждого разведения вносят (по выбору) в пробирки, содержащие по 5см3среды:
Эикмана, Кесслер. Булира. Хейфеца, «ХБ* или КОДА. Посевы помешают в термостат при темпе
ратуре 43 *С для первых пяти сред и 37 ’С для последней.
4.2.3. Через 24 ч учитывают рост на средах Эйкмана, Булира по помутнению среды и образо
ванию газа, на средах Хейфеца, «ХБ» и КОДА —по изменению цвета сред.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
4.2.4. Изпробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев в количестве 0.1—0.2 см3
на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо. Левина) и выдерживают в термостате
при температуре 37 ’С в течение 18—24 ч.
Типичные колонии Е. Coli характеризуются круглой формой, выпуклой или слегка приподня
той в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного или малинового цвета с металли
ческим блеском или без него на среде Эндо и фиолетового или черного —на среде Левина.
Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают на мясо-пептонный бульон,
выдерживают в термостате при температуре 37 *С в течение 18—24 ч. После этого одну часть
пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические
среды, заражения мышей, вторую —для приготовления кипяченого антигена.
4.2.5. У выделенных культур изучают морфологические, культурально-биохимические и пато
генные свойства с целью проведения их родовой дифференциации. Культурально-биохимические
свойства изучают по комплексу ЛИМАЦ (лактоза+иидол+метилрот+реакция фогес Проскауэра-,
цитратно-аммонийные соли +).
Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патоген
ных свойств бактерий проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки по
0-антигену.
Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую
культуру (пробирку со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором,
доводят суспензию бактерий до концентрации 5—6 млрд/см3, кипятят в водяной бане в течение I ч
71