ГОСТ 25384— 82 Стр. 7
среду питательную Игла для культивирования клеток переви
ваемых линий;
раствор Хенкса солевой, pH 7,2—7,4.
2.2.2. Подготовкак исследованию
2.2.2.1. Суспензии стенок и содержимого афт,полученные в
соответствии с пп. 1.5, 1.6 и 1.8, и оказавшиеся неактивными в
РСК, а также суспензии лимфатических узлов, сердечной мышцы,
поджелудочной железы, свернувшейся крови и пищеводноглоточ
ную слизь, полученные в соответствии с пп. 1.7 и 1.9, используют
для заражения монослойных культур первичнотрипсинизирован-
ных клеток (СП, ВП, ПЯ, щитовидной железы крупного рогатого
скота), перевиваемых линий (ВНК-21 и IB-RS-2), десять мышат
3—6-дневного возраста и пять морских свинок. Допускается зара
жение двух голов крупного рогатого скота в 18-месячном возрасте
и четырех поросят 3-месячного возраста, не содержащих в крови
специфических антител.
2.2.3. Проведениеисследования
2.2.3.1. Проведение биопробы на культурах клеток
Отбираютпробирки (флаконы) схорошо сформированным
монослоем без признаков старения и неспецифической дегенера
ции. На каждую пробу исследуемого материала берут по 10 про
бирок или по 2—3 флакона с перечисленными клеточными куль
турами. Непосредственно перед инокуляцией культуры дважды
отмывают от ростовой питательной среды раствором Хенкса. За
тем в пробирочные культуры вносят по 0,1—0,2 см3, а во флаконы
от 0,5 до 10 см3 (в зависимости от площади монослоя) исследуе
мых суспензий. Инокулированные культуры выдерживают в тер
мостате при температуре 37°С в течение 60 мин, затем освобож
дают от исследуемой суспензии и заливают поддерживающей пи
тательной средой. Одновременно ставят контроль на цитотоксич
ность раствора Хенкса. Инокулированные контрольные культуры
помещают в термостат при температуре 37°С и в течение 7 дней
проводят микроскопию для выявления дегенерации клеток. В слу
чае обнаружения дегенерации только з инокулированных культу
рах проводят дополнительный пассаж культуральной суспензии,
полученной после однократного промораживания культур с деге
нерацией монослоя при температуре минус 20°С. Полученную при
этом суспензию осветляют центрифугированием в течение 15 мин
с частотой вращения 3000 об/мини затем заражаютисходные
культуры в том же порядке, который предусмотрен для исследуе
мых суспензий проб патологического материала.
Специфичность дегенерации клеток проверяют в РСК.
2.2.3.2.Постановка биопробы на животных
Биопробу ставят на морских свинках, мышатах 3—6-суточного
возраста и естественно-восприимчивых к ящуру животных.