ГОСТ 25753—83 Crp. 5
4.2. Проведение и с с л е д о в а н и я
Перед постановкой реакции нейтрализации положительную и
отрицательнуюсывороткиразбавляютвсоотношении1:10
питательной средой для культуры клеток, содержащей антибио
тики, и прогревают в водяной бане при температуре 56 °С в
течение 30 мин. Б два ряда пробирок (по 7 шт.) вносят по 2 см8
сыворотки в каждую пробирку: в первый ряд —положительную,
во второй —отрицательную.
Готовят десятикратные разведения испытуемоговирусаот
10—1до 10~7 на питательной среде для культуры клеток в объемах,
достаточных для постановки реакции, и вносят в дваряда про
бирок с сыворотками, начиная с разведения 10~7. в объеме по
2 см3 на пробирку. Пробирки со смесью разведений вирусаи
сыворотки встряхивают и выдерживают в термостате при темпе
ратуре 37СС в течение 1 ч. Затем каждую смесь сыворотки с раз
ведениями вируса вносят по 1 см3 в 4 пробирки с культурой кле
ток. Пробирки инкубируют в термостате при температуре 37 °С.
4.3. Обра ботка р е з у л ь т а т о в
Результаты реакции учитывают по цнтопэтнческому действию
вируса через 2—5 суг. Для этого определяют титр исследуемого
вируса в присутствии положительной и отрицательной сывороток
и зыражаютего в логарифмахТЦД$;м«*. Титр вычисляют по
методу Рида и Менча. Видовую принадлежность вируса устанав
ливают при наличии разности в титрах вируса с отрицательной
и положительной сыворотками не менее чем на два логарифма.
5. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
Сущность методазаключаетсяв специфическомсвойстве
нейтрализующих антителсыворотки кровиподавлять способ
ность вирусавызывать иитопатическосдействие в культуре
клеток.
5.1. А ипа рату ра, ма т е р и а лы и р е а к т и в ы —по п 3.1.
5.2. Подготовкак и с с л е д о в а н и ю
Для групповой диагностики исследуют пробы сывороток в
разведениях 1:2 или 1:4 в культуре клеток против 1000 ТЦДдао.! с*’
вируса.Для контроляблагополучногостададопускается
исследование смеси сывороток от пяти животных. Дляподтвер
ждения положительного диагноза сыворотки исследуют в разведе
ниях от 1:2 до 1: 1G.
Испытуемые сыворотки выдерживают в водяной бане при
температуре 56°С в течение 30 мин.
53. Пр о в е д е н ие исследовании
Готовят двукратные разведения испытуемых сывороток от
1•2 до 1:16 на питательной среде для культуры клеток с анти-