9
- Подготовка к испытаниям
- Приготовление раствора Карреза I
Железистосинеродистый калий по ГОСТ 4207 массой (3,60 + 0,01) г растворяют в воде по 8.29 в мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки водой по 8.29, перемешивают.
Раствор при необходимости хранят при температуре 4 °С в течение 1 мес.
- Приготовление раствора Карреза II
Сернокислый цинк по ГОСТ 4174 массой (7,20 + 0,01) г растворяют в воде по 8.29 в мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки водой по 8.29, перемешивают.
Раствор хранят в темном месте при комнатной температуре в течение 6 мес.
- Приготовление буферного раствора
Глицилглицин по 8.21 массой (10,00 + 0,01) г и сернокислый магний по ГОСТ 4523 массой (0,25 + 0,01) г растворяют в 80 см3 воды по 8.29 в мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Добавляют 2,4 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.20 для установления по pH-метру по 8.4 значения pH раствора (7,6 + 0,1) ед. pH. Объем раствора в колбе доводят до метки водой по 8.29, перемешивают.
Раствор при необходимости хранят при температуре 4 °С в течение 3 мес.
- Приготовление раствора НАДН/АТФ/ФЕП
Динатриевую соль ß-никотинамид-аденин-динуклеотида (НАДН-№2) по 8.23 массой (0,077 + 0,001) г, динатриевую соль аденозин-5"-трифосфата (АТФ-№2) по 8.24 массой (0,200 + 0,001) г, натриевую соль фосфоенолпирувата (ФЕП-Na) по 8.25 массой (0,100 + 0,001) г и натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201 массой (0,300 + 0,001) г растворяют в воде по 8.29 в мерной колбе вместимостью 10 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки водой по 8.29, перемешивают.
Раствор при необходимости хранят при температуре 4 °С в течение 14 дней.
- Приготовление коэнзим/буферной смеси
К 1 см3 раствора НАДН/АТФ/ФЕП, приготовленного по 9.4, добавляют 10 см3 буферного раствора, приготовленного по 9.3, в конической колбе вместимостью 25 см3 по ГОСТ 25336, перемешивают.
Раствор при необходимости хранят при температуре 4 °С в течение 14 дней.
- Приготовление раствора пробы
В стакан вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают пробу меда массой (20,000 + 0,001) г, подготовленного по разделу 6. К пробе приливают 10—20 см3 воды по 8.29, мед тщательно растирают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два-три раза до полного растворения меда, затем стакан несколько раз обмывают небольшими порциями воды по 8.29, которые также сливают в мерную колбу, при этом объем жидкости не должен превышать 2/3 объема колбы. Добавляют по 1 см3раствора Карреза I, приготовленного по 9.1, и раствора Карреза II, приготовленного по 9.2, перемешивают. Объем раствора в колбе доводят до метки водой по 8.29, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 24 ч.
На следующий день содержимое колбы фильтруютчерез бумажный складчатый фильтр в коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
- Проведение испытаний
- В две конические колбы вместимостью 25 см3 по ГОСТ 25336 вносят по 1 см3 коэнзим/буферной смеси, приготовленной по 9.5. В первую колбу добавляют 0,10 см3 раствора пробы, приготовленного по 9.6,1,90 см3 воды по 8.29. Во вторую колбу — 2,00 см3 воды по 8.29. В каждую из колб прибавляют по 0,01 см3 суспензии ПК/ЛДГ по 8.27. Колбы закрывают пробками или лабораторной пленкой, хорошо встряхивают.
Примечание — Пипетку или наконечник пипетки перед дозированием раствора пробы ополаскивают не менее двух раз испытуемым раствором.
Через3 мин выдерживания при комнатной температуре измеряют оптические плотности (D1) испытуемого и холостого растворов из 10.1 по отношению к воде по 8.29 на спектрофотометре по 8.1 при длине волны X = 340 нм.