8
Описание химических процессов:
- Глицерин меда фосфорилируется аденозин-5"-трифосфатом (АТФ) в процессе реакции, катализируемой глицерокиназой (ГК), с образованием 1-глицерин-3-фосфата и аденозин-5"-дифосфата (АДФ):
Глицерин + АТФ ——^ 1-глицерин-3-фосфат + АДФ.
- АДФ реагирует с фосфоенолпируватом (ФЕП) при участии пируваткиназы (ПК) с образованием АТФ и пирувата:
АДФ + ФЕП ——^ АТФ + пируват.
- В присутствии фермента 1-лактат-дегидрогеназы (1-ЛДГ) пируват взаимодействует с НАДН с образованием 1-лактата, при этом НАДН окисляется до НАД+:
Пируват + НАДН + Н+ ———^ 1-лактат + НАД+.
- Количество НАДН, использованное в реакции, эквивалентно содержанию глицерина в меде.
- Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
- Спектрофотометр, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны 340 нм и кюветами с четырьмя прозрачными стенками и длиной оптического пути 10 мм.
- Весы по ГОСТ Р 53228 высокого класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,1 мг.
- Термостат, водяная баня или другое устройство, позволяющее проводить равномерный нагрев до температуры 40 °C.
- pH-метр/иономер с пределами допускаемой основной абсолютной погрешности прибора при преобразовании измеренного значения ЭДС в pX (pH) + 0,02 ед. pX (pH).
- Секундомер механический СОСпр-26-2-000.
- Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ Р 51568.
- Шпатель лабораторный ШЛ.
- Термометр ртутный стеклянный лабораторный с диапазоном значений от 0 °С до 100 °С и ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
- Колбы мерные 1(2)-10(100)-2(ПМ) по ГОСТ 1770.
- Колбы конические Кн-1(2,3)-25(250)-14/23(29/32) ТС по ГОСТ25336.
- Пипетки 1-2-1-1(5, 10) по ГОСТ 29227.
- Пипетка одноканальная переменного объема с диапазоном дозирования 5-50 мкп.
- Цилиндры 3-100-2 по ГОСТ 1770.
- Стаканы В 1-100 ТС по ГОСТ 25336.
- Воронка лабораторная В-75-110 ХС по ГОСТ 25336.
- Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026, марки Ф или ФС или фильтры обеззо- ленные (синяя лента).
- Палочки стеклянные лабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.
- Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х. ч.
- Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174, х. ч.
- Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч. д. а., раствор молярной концентрацией 0,5 моль/дм3.
- Глицилглицин с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.
- Магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 4523, х. ч.
- Динатриевая соль ß-никотинамид-аденин-динуклеотида 4-водная восстановленной формы с содержанием основного вещества не менее 97,0 %.
- Динатриевая соль аденозин-5"-трифосфата с содержанием основного вещества не менее
- %.
- Натриевая соль фосфоенолпирувата с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.
- Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201, х. ч.
- Суспензия пируваткиназа/лактатдегидрогеназы (ПК/ЛДГ) с концентрацией пируваткиназы 3 мг/см3, концентрацией лактатдегидрогеназы 1 мг/см3.
- Суспензия глицерокиназы (ГК) с концентрацией основного вещества 1 мг/см3.
- Вода для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501, степень чистоты 2.
Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.
Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже указанных.