9
- Через Эмин выдерживания при комнатной температуре измеряют оптические плотности (D1) испытуемого и холостого растворов (см. 10.1) по отношению к воде на спектрофотометре по 8.1 при длине волны X = Э40 нм.
- В каждую из колб добавляют по 0,05 смЭ суспензии алкогольдегидрогеназы, приготовленной по 9.5, закрывают пробками или лабораторной пленкой, хорошо встряхивают.
Через 5—10 мин выдерживания измеряют оптическую плотность (D2) каждого раствора, полученного по 10.Э, по отношению к воде на спектрофотометре по 8.1 при длине волны X = 340 нм.
- При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.
- Обработка и представление результатов испытаний
- Значение разности оптической плотности AD, вычисляют по формуле
- Если найденное по формуле (1) значение AD менее 0,100, то раствор пробы, приготовленный по 9.6, разбавляют и проведение испытания начинают снова по разделу 10. Отмечают фактор разбавления раствора меда (F).
- Значение массовой концентрации этанола X1, мг/дмЭ, вычисляют по формуле
Х| = F ■ A D ■ Vt ■ M ■ 10Э-б-1 • d“1 •Vp1 • 10-Э, (2)
где F — фактор разбавления раствора пробы;
AD — значение разности оптической плотности по формуле 1;
Vt = 3,55 — испытуемый объем раствора пробы, см3;
M = 46,07 — молярная масса этанола, г;
б =6,3 — коэффициент экстинции НАДН, см3 ■ ммоль-1 ■ см-1; d = 1,00 — длина оптического пути, см;
Vp = 0,50 — объем раствора пробы, см3.
- Значение массовой доли этанола X2, мг/кг, вычисляют по формуле
X? = X ■ т- ■ 103, (3)
где X1 — значение массовой концентрации этанола по формуле 2, мг/дм3; т — анализируемая проба в 1 дм3 раствора пробы, г/дм3.
- За результаты испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой доли этанола, полученных в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между параллельными определениями не превышает предела повторяемости r по ГОСТ Р ИСО 5725-6. Значение предела повторяемости r приведено в таблице 1.
При превышении предела повторяемости r целесообразно провести дополнительное определение значения массовой доли этанола и получить еще один результат. Если при этом абсолютное расхождение (X2, макс - X2, мин) результатов трех определений не превышает значения критического диапазона CR095(3), то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трехопределений массовой доли этанола. Значение критического диапазона CR0 95(3) приведено в таблице 1.
При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.
- Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R по ГОСТ Р ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытания и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 1.