ГОСТ Р 54414-2011; Страница 9

1. 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до ком­натной температуры, при необходимости фильтруют и используют для проведения электрофореза.
2. Приготовление раствора стандартных белков
1. Набор стандартных белков для градуировки с известной молекулярной массой растворяют в

5. см3 буферного раствора, приготовленного по 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры и используют для проведения электрофореза.

1. Для видовой идентификации рыбы методом SDS-электрофореза используется набор стандартных белков для градуировки с молекулярной массой от 14400 до 97000 а. е. м. промышленного производства в виде сухой замороженной смеси.
2. Для автоматизированной разделительной системы используется набор белков с общей массой 100 мкг:

• фосфорилаза Б с молекулярной массой 97000 а. е. м.;
• альбумин с молекулярной массой 66000 а. е. м.;
• овальбумин с молекулярной массой 45000 а. е. м.;
• карбоангидраза с молекулярной массой 30000 а. е. м.;
• ингибитор трипсина с молекулярной массой 20100 а. е. м.;
• альфа-лактальбумин с молекулярной массой 14400 а. е. м.

9.3 Проведение SDS-электрофореза

1. Полиакриламидный гель помещают в систему в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
2. Вставляют буферные полоски в отделения держателя буферных полосок: одну — в отделе­ние катода и одну — в отделение анода.
3. Электроды устанавливают в верхнем положении.
4. Формируют лунки в парафиновой пленке с помощью штампа: штамп с лунками, обращенны­ми вверх, кладут на стол, накрывают парафиновой пленкой защитным слоем вверх (по направлению ли­ний отверстий), в парафиновой пленке, двигаясь вдоль линии лунок, делают углубления при помощи стеклянной палочки, а затем снимают защитный слой.
5. Растворы, т. е. раствор анализируемого образца и аналогично приготовленный раствор ре­ференс-образца, полученные по 9.1.5, а также раствор стандартных белков для градуировки с извес­тной молекулярной массой, приготовленный по 9.2, вносят микродозатором в каждую лунку 1,5 мкп.
6. Аппликатор опускают на поверхность растворов (стандартных белков для градуировки, ана­лизируемого образца и референс-образцов), помещенных в лунки по 9.3.5, сформированные в парафи­новой пленке с помощью штампа по 9.3.4, нарушая поверхность капель для заполнения капилляров.
7. Аппликатор, наполненный образцами по 9.3.6, помещают в систему со стороны катода и про­водят электрофорез в автоматическом режиме в соответствии с инструкцией к системе.

Условия разделения: напряжение 220 В, ток 10 мА, мощность 2,5 Вт, температура 15 °С. Когда раз­деление закончено, гель вынимают и переносят в камеру окрашивания. Окончанием разделения служит звуковой сигнал, подаваемый системой.

4. Проведение окрашивания

Полиакриламидные гели окрашивают в автоматическом режиме с применением кумасси в соотве­тствии с таблицей 1 или азотнокислого серебра в соответствии с таблицей 2.