8
Медицинским шприцем набирают 10 см3 водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим сорбированный из жидкой части анализируемой пробы компота краситель по 3.4.7.5. Десорбцию красителей из патронов проводят водным аммиаком — по 3.4.7.4.
Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см3 раствора, приготовленного по 3.4.3.
- Подготовка хроматографической камеры
В хроматографическую камеру вносят элюент по 3.4.1 в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.
- Подготовка пластин для ТСХ анализа
На хроматографическую пластину карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта (параллельно рискам на обратной стороне пластины). На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.
3.5 Обнаружение и идентификация красителей
На хроматографическую пластину шириной 10 см, подготовленную по 3.4.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 растворов КО, приготовленных по 3.4.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм3 анализируемых растворов красителей по
- и 3.4.7.6. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента — 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.
Линейкой измеряют расстояние от центра каждого пятна красителя и линии границы элюента до линии старта.
- Обработка результатов
- Значение Rf стандартного синтетического красителя вычисляют по формуле
Rf = \ (1)
f 4
где lk — расстояние до линии старта от центра пятна стандартного синтетического красителя, см;
/э — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
- Значение R| обнаруженного красителя вычисляют по формуле
R\ = £, (2)
f 4
где lk — расстояние до линии старта от центра пятна обнаруженного синтетического красителя, см;
1э — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
Сравнивают значения R|, рассчитанные по формуле 2, со значениями Rf КО, рассчитанными по формуле 1, и при совпадении R| и цвета пятен обнаруженных красителей с Rf и цветом пятен КО делают заключение о наличии или отсутствии эритрозина и флоксина В в анализируемом компоте.