ГОСТ 25583— ВЗ Стр. 4
2.2.2. Подготовка к исследованию
Пробы сыворотки крови инактивируют прогреванием при тем
пературе 56°С в течение 30 мин. Загрязненную сыворотку фильт
руют через бактериальные фильтры или обрабатывают антибио
тиками.
2.2.3. Проведение исследования в реакции нейтрализации на
куриных эмбрионах
2.2.3.1. Вреакциииспользуют вирус с титром не ниже 107
ЭИД 50/1 см3. Готовят серийные десятикратные разведения виру са
от 10“3 до 10-* Равные количества разведенного вируса, спе
цифических антисывороток и испытываемых сывороток крови сме
шивают и смесь оставляют на 1 ч при комнатной температуре. .
Каждым разведением инокулируют по четыре куриных эмбрио
на 9-суточного возрастав аллантоисную полостьв дозе 0,2 см3.
Инокулированные куриные эмбрионы овоскопируют ежедневно в
течение 3—8 сут(в зависимости от используемого штамма); по
гибшие эмбрионы в течение первых 24 ч не учитывают.
2.2.3.2. Обработка результатов
По истечении 3—8 сут определяют инфекционный статус каж
дой группы инокулированныхкуриных эмбрионов и вычисляют
ИД
50
. Разница между логарифмами титра контрольного ряда ви
руса и титра смеси вируса с испытываемой сывороткой выражает
индекс нейтрализации.
При значениях индекса нейтрализации от 0,0 до 1,0 результат
реакции считают отрицательным, от 1,1 до 2,0 — сомнительным,
от 2,1 и выше — положительным.
Если для 20 и более процентов испытываемых сывороток кро
ви получится сомнительный результат, исследование проводят в
реакции преципитации в агаровом геле.При получении сомни
тельныхрезультатов проводят исследованиесывороток крови,
полученных при повторном взятии крови от птицы на 14—21 сут.
Вируснейтрализуюшиеантитела образуются через 2—3 недели
после вспышки заболевания и сохраняются пожизненно, а преци-
питирующие антитела — от 2 до 7 недельпосле начала зараже
ния.
2.2.4. Проведениеисследованияв реакции нейтрализации на
культурах клеток
2.2.4.1. Берут свежеполученную культуру клеток при образо
вании сплошного монослоя и адаптированный к культурам кле
ток вирус с титром 5—5,5 ед/см3.
Готовят серийные 10-кратные разведения вируса до 10~б. Каж дое
разведение вируса смешивают с равным количеством типоспе
цифической сыворотки. Если в реакции используются кроличьи
контрольные сыворотки (положительная и отрицательная), их раз
водят до 10-1, так как неразведенные сыворотки вызывают неспе-
19