ГОСТ 25583— 83 Стр. 2
2.1.1. Аппаратура и материалы
Для проведения исследования применяют:
термостат с температурой нагрева 37—38СС;
инкубатор;
ступки фарфоровые;
центрифугу с частотой вращения 3000 об/мин;
пробирки стеклянные вместимостью 10, 15 и 20 см3 по ГОСТ
10515—75;
овоскоп;
шприцы с иглами;
куриные эмбрионы 9-суточного возраста;
культуру клеток почек куриных эмбрионов или фибробласты;
раствор Хенкса;
стрептомицин, пенициллин.
2.1.2. Подготовка к исследованию
Пробы органов и тканей растирают в стерильной ступке в изо
тоническом буферном растворев соотношении 1:10 и экстраги
руют в течение 2 ч при 4°С. Суспензию центрифугируют с частотой
вращения от 1500 до 2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную
жидкость обрабатывают 2000 ЕД/см3 пенициллина и 2 ЕД/см3
стрептомицина.
2.1.3. Проведение исследования
Обработанную антибиотиками надосадочную жидкость иноку-
лируютв дозе 0,2 см3 черезвоздушную камеру в аллантоисную
полость шести куриным эмбрионам 9-суточного возраста.
Зараженные эмбрионы инкубируют при 37,5°С и относительной
влажности 60—70% и два раза в день овоскопируют.Эмбрионы,
погибшие в течение 24 ч после заражения, не учитывают. Остав
шихся в течение 72 ч трех живых эмбрионов убивают охлаждением
при температуре 4°С, а остальных собираюти охлаждают через
7 сут после заражения.. От первых трех эмбрионов собирают
ал лантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку для
следую щего пассажа, а остальные эмбрионы исследуют на
наличие ма кроскопических изменений.
Проводят четыре последовательных пассажа вируса на кури
ныхэмбрионах, так как первый пассажв большинстве случаев
не вызывает гибели или изменения эмбрионов.
Идентификацию вируса проводят на 9-суточных куриных эм
брионах в реакции нейтрализации (PH), используя известные спе
цифические антисыворотки как минимум к двум основным серо
типам вируса(Massachusets, Connecticut)с индексом нейтрали
зации антисывороток более 3 lg (см. п. 2.2.3.1), или в реакции
нейтрализации в культуре клеток почек куриных эмбрионов
или фибробластов (см. п. 2.2.3.2).
17