ГОСТ 25586— 83 Стр. 7
2.3. Метод в ыд е л е н и я вируса
Сущность метода заключается в выделении вируса из ткани
почек больной или подозреваемой в заражении птицы и последу
ющей идентификации его серологическим методом.
2.3.1. Аппаратура и материалы
Для проведения исследования применяют:
термостат с температурой нагрева 37—38°С;
мешалку магнитную;
пробирки стеклянные вместимостью 10, 15 и 20 см3 по ГОСТ
25336—82;
пипеткипастеровскиеили пипеткивместимостью 1, 2, 5 и
10 см3 по ГОСТ 20292—74;
колбы конические стеклянныевместимостью 50 и 100 см3 по
ГОСТ 1770—74;
флаконыдля культурыклеток вместимостью 50, 100, 200 и
500 см3из нейтрального стекла;
раствор Хенкса;
трипсин, 0,25%-ный раствор;
среду № 199;
сыворотку телячью эмбриональную.
2.3.2. Проведение исследования
Из ткани почек только что убитой больной птицы вырезают ку
сочки размером 2—3 см3, которые отмывают раствором Хенкса и
добавляют 0,25%-ный раствор трипсина в соотношении 1:10. Сус
пензиюперемешивают на магнитноймешалкев течение 20—
30 мин при комнатной температуре.
Клеточную суспензию затем фильтруют через два слоя марли
и центрифугируютв течение 10—15 минс частотой вращения
1000 об/мин, готовят суспензию клеток в среде роста, содержа
щей в I см3 800 тыс. клеток, высевают ее во флаконы и инкуби
руют при температуре 37°С.
2.3.3. Обработка результатов
При наличии вируса проявляется цитопатическое действие
(ЦПД) в виде образования очагов (фокусов), состоящих из скоп
ления округленных рефрактильных клеток (спустя 48—72 ч), син
цития и микроскопически видимых бляшек — негативных пятен
(спустя 90—120 ч). Сроки появления ЦПД зависят от дозы ви
руса и количества проводимых пассажей. При первичном культи
вировании возбудителя специфические морфологические измене
ния клеток проявляются часто лишь во втором и третьем пасса
жах вируссодержащего материала спустя 48—96 ч. Специфич
ность ЦПД подтверждают исследованием отдельных проб мате
риала в реакции преципитации в агаровом геле с иммунной сы
вороткой.
27