С. 4 ГОСТ 27318—87
v
спытан я.
среду Левенштейна-йенсена;готовятследующимобразом:
2,4 г однозамешенного фосфорнокислого калия. 6.24 г магния сер
нокислого, 0.6 г магния лимоннокислого. 3,6 г /.-аспарагина, 12 см3
глицерина растворяют в указанной последовательности в 600 см*
воды при слабом подогревании и стерилизуют в течение 2 ч
теку чим паром. К раствору добавляют 100 см* яичной массы.
Смесь фильтруют через марлевый фильтр, добавляют 200 см*
стериль ного 2%-ного раствора малахитовойзелени и
разливают в про
бирки приблизительно по 5 см*. Свертывание проводят при 85°С
в течение 45 мин.
• Яичную массу готовят из свежих диетических яиц, вымытых
проточной теплой водой щеткой с мылом. Вымытые яйца погружа ют
на 30 мин в 70%-ный спирт, а затем над спиртовкой в боксе
разбивают стерильным пинцетом в колбу со стеклянными шарика ми
и хорошо перемешивают:
: бульон мясо-пептонный (МГ1Б);
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
П р и м е ч а н и я :
1. Для контроля стерильности указанные среды помешают в термостат
с температурой 37—38‘С на 2 сут.
до и
2. При
и
посевах используют среды, приготовленные нс более чем за 14
c
7
t
.
2.3. П р о в е д е н и е и с п ыт а н ия
С целью получения единичных колоний и учета скорости рос
та при разных температурных режимах, а также характера роста
на мясо-пептонном бульоне с поверхности отдельной колонии бе
рут 2—5 мг испытуемой культуры микобактерий и помещают в
стерильную пробирку с 1—2 см* растворахлористого натрия с
массовой долей 0,85%.
Взятую массу микобактерий растирают стеклянной палочкой
по стенке пробирки и добавляют раствор хлористого натрия до
концентрации 1 мг/см*.
Взвесь культуры микобактерий высевают с помощью пипетки
диаметром 3—4 мм в пять пробирок со средой Левенштейна-
йенсена к в две пробирки с мясо-пептонным бульоном. Обе про
бирки с .мясо-псптонным бульоном и одну пробирку со средой
Левенштейна-йенсена инкубируют при 37—38°С. По одной про
бирке со средой Левенштейна-Йснсена инкубируют при 25 и 45°С.
Две оставшиеся пробирки со средой Левенштейна-йенсена ставят
в
термостат при 37—38°С для изучения пигмектообразовання.
Учет роста при различных температурах оценивают, размес
тив пробирки с питательными средами, инкубированными при
различных температурах, рядом друг с другом, и сопоставив раз
витие отдельных колоний.
При оценке регистрируют, па какой питательной среде и в ка
кой срок появляется колония бактерий, и какова ее пигментиро-
ванность.