ГОСТ Р 70149—2022
Таблица 1
Наименование показателя
1234
56
789
Объем основного
раствора триптофана, см301,01,52,0
2,53,0
3,54,04,5
Массовая концентра
ция триптофана в граду
ировочных растворах в
пересчете на массовую
долю триптофана в ана
лизируемой пробе, г/4 г
навески00,0040,0060,008
0,0100,012
0,0140,0160,018
Растворы хранят в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 2 недель.
8.2 Построение градуировочного графика
8.2.1 В мерные колбы вместимостью 100 см3 вносят по 1 см3 каждого градуировочного раство
ра. Затем в каждую колбу добавляют по 0,5 см3 раствора л-диметиламинобензальдегида и 0,2 см3
раствора азотистокислого натрия (нитрита натрия) и осторожно приливают 28 см3 концентрированной
соляной кислоты. Колбы оставляют в вытяжном шкафу на 30 мин для проведения цветной реакции.
Через 30 мин содержимое колб доводят до метки раствором этилового спирта и измеряют интен
сивность синей окраски растворов (оптическую плотность) на спектрофотометре или фотоэлектроко
лориметре (с красным светофильтром) при длине волны (610 ± 2) нм в стеклянной кювете с толщиной
поглощающего свет слоя 5 мм.
8.2.2 Для построения градуировочного графика вычисляют среднее арифметическое оптической
плотности результатов двух измерений каждого градуировочного раствора.
По полученным средним данным строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс мас
совую концентрацию триптофана (в мг в 100 см3 окрашенного раствора), а на оси ординат — соответ
ствующее значение оптической плотности.
8.2.3 Градуировочный график проверяют по трем градуировочным растворам в том интервале, в
котором проводят испытания.
Градуировку признают стабильной, если отклонение найденной массовой доли триптофана от
заданного значения не превышает 5 %. В противном случае анализируют градуировочный раствор еще
два раза. При повторных отклонениях, превышающих указанный норматив хотя бы один раз, градуи
ровку проводят заново, начиная с приготовления нового основного раствора.
8.3 Подготовка пробы к испытанию
8.3.1 Навеску пробы массой 4 г, взвешенной с точностью до 0,01 г, высушивают в сушильном
шкафу при температуре (103 ± 2) °С до постоянной массы. Затем проводят обезжиривание пробы
на аппарате Сокслета с применением диэтилового эфира по ГОСТ 23042. После обезжиривания
пробу количественно переносят в плоскодонную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 4 см3
дистиллированной воды и 20 см3 раствора гидроокиси натрия. Колбу подключают к холодильнику
с охлаждением и ставят на электрическую плитку для проведения щелочного гидролиза. Гидролиз
про водят в течение 2 ч с момента начала кипения.
8.3.2 После проведения гидролиза колбу охлаждают до комнатной температуры, содержимое
колбы количественно переносят в мерный стакан и доводят pH гидролизата до 6,5 с помощью рас
твора серной кислоты. После этого доводят объем раствора дистиллированной водой до 50
см3, перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр из фильтровальной бумаги.
9 Проведение испытания
9.1 Подготовку спектрофотометра или фотоэлектроколориметра к проведению измерений
осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации прибора.
9.2 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 фильтрата, добавляют 0,5 см3 раствора
л-диметиламинобензальдегида и 0,2 см3 раствора азотистокислого натрия (нитрита натрия) и осторожно
5