ГОСТ ISO 15302—2019
9 Методика проведения испытания
9.1 Очистка пробы
9.1.1 В стеклянном химическом стакане взвешивают с точностью до 0,001 г около 0,400 г жира
или масла и растворяют в 2 мл петролейного эфира (см. 5.2). С помощью микрошприца добавляют
20 мкл раствора внутреннего стандарта (см. 5.10), что эквивалентно 50 мкг/кг при пересчете на массу
пробы. Если предположить, что содержание бенз(а)пирена в пробе будет высоким, добавляют 50 мкл
раствора внутреннего стандарта (см. 5.10), что эквивалентно 125 мкг/кг при пересчете на массу
пробы.
9.1.2 Колонку для хроматографии (см. 6.1) заполняют петролейным эфиром (см. 5.2) до половины
ее высоты. Незамедлительно взвешивают 22 г оксида алюминия (см. 5.8) в небольшом химическом ста
кане и немедленно переносят его в колонку, после чего осторожно встряхивают колонку для усиления
эффекта осаждения оксида алюминия.
9.1.3 Добавляют безводный сульфат натрия (см. 5.7) в верхнюю часть колонки для образования
слоя толщиной около 30 мм.
Открывают кран и дают петролейному эфиру стечь до уровня верхней части слоя сульфата
9.1.4
натрия.
9.1.5
9.1.6
Под колонкой помещают мерную колбу вместимостью 20 мл.
Вводят раствор жира или масла (см. 9.1.1) в колонку. Промывают колонку минимальным
количеством петролейного эфира (см. 5.2), позволяя слою растворителя пройти сквозь слой сульфата
натрия в период между промываниями.
9.1.7 Элюируют бенз(а)пирен из колонки петролейным эфиром со скоростью потока около
1 мл/мин, отбрасывая первые 20 мл элюата и собирая последующие 60 мл элюата в круглодонную
колбу вместимостью 100 мл.
9.1.8 Выпаривают растворитель из элюата на водяной бане, установленной на 65 °С, до объема
примерно 0,5— 1,0 мл и переносят концентрированный раствор в маленький флакон с горловиной под
алюминиевый колпачок (см. 6.7), предварительно взвешенный с точностью до 0,1 мг.
9.1.9 Продолжают выпаривание из маленького флакона на водяной бане (см. 6.2) при темпера
туре 35 °С в слабом токе азота (около 25 мл/мин) до практически сухого состояния. Ополаскивают кру
глодонную колбу, используя около 1 мл петролейного эфира, и количественно переносят промывочную
жидкость в маленький флакон, продолжая выпаривание в атмосфере азота. Ополаскивание повторяют
и промывочную жидкость переносят в маленький флакон еще раз.
9.1.10 Продолжают выпаривание при температуре 35 °С в токе азота до полного высушивания.
9.1.11 Взвешивают маленький флакон с точностью до 0,1 мг и рассчитывают массу остатка. Ма
ленький флакон закрывают прокладкой из ПТФЭ и укупоривают алюминиевым колпачком. Хранят при
температуре 4 °С.
9.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография
9.2.1 В качестве элюента используют смесь 880 мл ацетонитрила (см. 5.3) и 120 мл воды (см. 5.1).
Для предотвращения гашения флуоресценции элюент дегазируют с целью удаления кислорода. Ис
пользуют продувку гелием или установку вакуумной дегазации.
9.2.2 Элюируют со скоростью потока около 1 мл/мин.
9.2.3 Градуировочная кривая и определение относительного коэффициента чувствительности де
тектора: из стандартных растворов бенз(а)пирена (см. 5.9.2) готовят пять градуировочных растворов
таким образом, чтобы вводимый объем 50 мкл каждого из них давал показания, соответствующие 0,01;
0,04; 0,2; 1,0 и 2,0 нг бенз(а)пирена. К полученным растворам добавляют 0,5 нг внутреннего стандарта.
Строят градуировочную кривую из пяти точек, используя площади пиков, полученные интегратором и
регистрирующим устройством при анализе пяти разведений стандартных растворов. Полученные
данные используются также для расчета относительного коэффициента чувствительности детектора
(см. 10.1) между бенз(а)пиреном и внутренним стандартом.
9.3 Анализ проб
9.3.1В маленький флакон, содержащий очищенный остаток (см. 9.1.11), вводят 250 мкл смеси
ацетонитрила и тетрагидрофурана (см. 5.5). Растворяют остаток, осторожно вращая маленький флакон
и избегая контакта растворителя с прокладкой.
4