ГОСТ Р 57246—2016
5.7.2.8Чашку Петри помещают в климатическую камеру при температуре (21 ± 1) °С. относитель
ной влажности воздуха 70— 90 % в равномерном освещении камеры лампами дневного света освещен
ностью не менее 100 лк в течение 18 ч в сутки и выдерживаютдо начала от рождения гусениц.
5.7.2.3 В период массового отрождения гусениц их рассаживают в чашки Петри по 150— 200 штук,
в которые предварительно наносят питательную среду толщиной 3— 5 мм кольцом от 1/3до 2/3диамет
ра чашки Петри. Гусениц содержат в климатический камере при режимах по 5.7.2.8 без смены корма.
Питательную среду готовят следующим образом:
200 г сухих семян фасоли замачивают в 300 см3воды втечение суток, затем в размельчителе тка
ней РТ-1 размельчают до образования однородной кашицы. Постоянно помешивая, добавляют после
довательно следующие компоненты:
- 15 гдрожжей.
- 12 гсахарозы,
- 3 г метабена. растворенных в 10см3 этилового спирта.
- 4 г калия фосфорнокислого двузамещенного.
- 5 см3 40 %-ного раствора формалина.
- 9 гстерильной, измельченной вэлектрокофемолке фильтровальной бумаги, на которую вылива
ют расплавленный. охлажденный до температуры 70 еС агар (15 гмикробиологического агара, расплав
ленного в 350 см3воды).
Смесь охлаждают до температуры 40 °С. вносят 4 г аскорбиновой кислоты и перемешивают.
Питательную среду разливают в стерильные банки, закрывают стерильной бумагой и хранят при
температуре 5 ЭС не более 14дней.
5.7.2.10 Первых перелинявших на 2-й возраст гусениц, количество которых не более 5 % от отро
дившихся. выбраковывают. Массовый выбор тест-объекта проводят на 2— 3 день после начала линьки
вручную.
5.7.3 Проведение испытания
Готовят параллельные водные суспензии контрольного образца вдендробациллина из расчета 1г
препарата и 99 г воды в пяти концентрациях: 0.25; 0.06; 0.016; 0.004; 0,001 %. обеспечивающих гибель
тест-объекта от (15 i 56)до (85 ±5) %.
Исходную 0,25 %-ную суспензию готовят с помощью размельчителя тканей РТ- 2 при скорости
3000 об/мин в течение 2 мин, а суспензию других концентраций — путем последовательных четы
рехкратных разведений.
Каждую концентрацию дендробациллина испытывают в трех параллельных определениях.
3см3суспензии каждой концентрации тщательно перемешивают с 15гпитательной среды вступке
до получения однородной массы.
Полученную массу раскладывают на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри по (5
1
1) г в
каждую. Туда же помещают по 15 гусениц второго возраста. Одновременно ставят контрольный опыт в
трех параллельных определениях:
-15 гпитательной среды перемешивают с 3 см3 воды и полученную массу распределяют в 3 чашки
Петри, вкаждую изкоторых помещают по 15гусениц. Чашки Петри с гусеницами помещаютв термостат и
выдерживают при температуре (21 ± 1) °С. Количество погибших гусениц подсчитывают на 6 сутки.
5.7.4 Обработка результатов
Гибель гусениц (Х3) в долях с поправкой на гибель в контрольном опыте вычисляют отдельно для
каждой концентрации дендрабацилина по формуле Аббота, формула 3:
у3-Р°-Рк(3)
X - Р к ’
где Ро — доля мертвых особей вопыте (среднее арифметическое трех параллельных определений):
Рк — доля мертвыхособей вконтроле (среднее арифметическое трех параллельных определений).
На основании полученныхданных вычисляютЛ К50по формуле Кербера в процентах концентрации
дендробациллина в суспензии или в мгдендробациллина на 1 г корма, формула 4:
фЛКго =»дСм - Gx(vx3- 0.5),(4)
где См — максимальная из испытанных концентраций;
G — логарифмы отношения предыдущей концентрации кпоследующей (логарифм кратности раз
ведения).
8