ГОСТ Р 56964—2016
Приложение С
(обязательное)
Провокационный метод в динамических условиях
С.1 Порядок проведения испытания
С.1.1 Посев
Помещают шесть испытуемых и шесть контрольных образцов в стерилизованные конические колбы вмес
тимостью 250 см3, каждый отдельно.
Пипеткой переносят (50.0 ± 0.5) см3 посевной культуры, приготовленной согласно разделу 8. и засевают
каждый образец и контроль.
Если контрольных образцов не имеется, засевают стерильные конические колбы без образцов и берут их
в качестве контроля для определения эффективности испытаний.
С.1.2 Извлечение после посева (нулевой момент времени)
Пипеткой отбирают 2 см3 из трех засеянных образцов и трех контролей в отдельно приготовленные сте
рильные колбы, в каждой из которых содержится 18 см3питательной среды (6.4). чтобы нейтрализовать противо-
бактериальную активность.
Встряхивают их по дуге примерно 30 см в течение 30 с или перемешивают в течение 5с » 5 циклов на вихревом
смесителе (5.9).
С.1.3 Инкубирование
Инкубируют три засеянных образца и три засеянных контроля при температуре (37 ± 2)“С в течение (24 ± 1)ч
в инкубаторе-встряхивателе (5.11) при 120 мин-1.
С.1.4 Извлечение после инкубации (время 24 ч)
Поступают по С.1.2.
С.1.5 Определение числа жизнеспособных бактерий
Определяют число жизнеспособных бактерий в каждом извлечении от образца в С.1.2 и С.1.4 по А.1.5.
С.2 Обработка результатов
С.2.1 Расчет числа жизнеспособных бактерий
Для каждого образца определяют число восстановившихся жизнеспособных бактерий согласно формуле
М = 2 - В -10,(С.1)
где М — число жизнеспособных бактерий каждого образца (выраженное в КОЕ/см3);
2 — среднее число жизнеспособных бактерий в двух чашках Петри.
В — коэффициент разбавления;
10 — коэффициент рвзбавпения нейтрализации.
С.2.2 Оценка эффективности испытания
Предельное значение разности трех контролей после посева и инкубации должно быть д(1дС)&1.
Среднее число колоний контролей непосредственно после посева должно быть не менее 1 105КОЕ/см3.
В методе подсчета колоний на чашках вычисляют коэффициент бактериального роста F по следующей
формуле, причем Едолжен быть йО.
F = lgC ,-lgC a.(С.2)
где F — коэффициент бактериального роста контролей;
С, — среднее число колоний на трех контрольных образцах после инкубации. КОЕ/см3.
С0 — среднее число колоний на трех контропях непосредственно после посева. КОЕ/см3.
Результат считают достоверным, если указанные условия выполняются. В противном случае результат
считают недостоверным, и образцы необходимо испытать повторно.
С.2.3 Расчет коэффициента антибактериальной активности
Вычисляют коэффициент антибактериальной активности согласно разделу 11.
9