ГОСТ Р 8.889-2015
7.7 Определение диапазона линейности фотометрической шкалы спектрофлуоримотра
7.7.1 Диапазон линейности фотометрической шкалы определяют как верхнюю и нижнюю границы
концентраций серии растворов сульфата хинина, для которых значения скорректированной на фон
флуоресценции пропорциональны заданным значениям концентрации, в соответствии с рекомендаци
ями [3].
7.7.2 Измерения проводят при следующих значениях рабочих параметров спектрофлуори-
метра:
- длина волны возбуждающего излучения - 350 нм. спектральная ширина щели - 5 нм; -
длина волны излучения флуоресценции - 450 нм. спектральная ширина щели - 5 им; -
время усреднения сигнала флуоресценции - 2 с.
Допускается проводить измерения на других значениях спектральной ширины щели и времени
усреднения, если они указаны в методике поверки конкретного слектрофлуориметра .
7.7.3 Аттестованные смеси (растворы) с концентрациями сульфата хинина 100.10,1 мг/дм3 ,100,
10 и 1 мкг/дм3, а также фоновый раствор готовят по методике, приведенной в приложении Б. и исполь
зуют в течение суток.
7.7.4 Измеряют флуоресценцию растворов сульфата хинина в порядке возрастания концентра
ции. начиная с фонового раствора, получают для каждого из растворов пять параллельных результатов
измерений. При проведении измерений используют одну и ту же кювету, которую перед каждым запол
нением дважды споласкивают испытуемым раствором.
По данным, полученным для всех растворов, строят в логарифмических координатах график за
висимости интенсивности скорректированной на фон флуоресценции от концентрации.
7.7.4.1 Определяют фоновый уровень флуоресценции FQ , как среднее арифметическое по ре
зультатам пяти измерений Fq, ( образца с фоновым раствором по формуле
F0 = £ F 0kt
5.(И)
)
7.7.4.2 По результатам измерений флуоресценции образцов с заданной концентрацией сульфата
хинина определяют значения скорректированной на фон флуоресценции Ф1ки их десятичные логариф-
мы У*
O *»F *-F 0;Yft = lg(<t>//0,(
12
где / - номер образца в порядке возрастания концентрации ( / = 1 - 7 ) :
к - номер параллельного определения ( к = 1 - 5 );
FА - результат измерения флуоресценции.
Вычисляют средние значения логарифмов скорректированной на фон флуоресценции У, = Е У* / 5 .
7.7.4.3 Вычисляют значения логарифмов концентраций Х( = lg(C,)
77.4.4 Наносят на график точки с координатами (X, YJ и проводят через них гладкую или кусочно
линейную кривую.
7.7.5 По данным, полученным для трех растворов с концентрациями сульфата хинина 1 мг/дм3 .
100. 10 мкг/дм3, методом наименьших квадратов строят линейную зависимость У от X, наносят ее на
график, построенный по 7.7.4, и экстраполируют прямую в обе стороны вплоть до минимальных и
мак симальных значений концентрации. Эта прямая отображает в логарифмических координатах
линейную зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации.
7.7.6 Сопоставляя кривую, построенную по 77.4.4 (по данным для всех растворов), и прямую,
построенную по 7.7.5 (по данным для трех растворов из области заведомой линейности), определяют
следующее:
- концентрацию, выше которой отклонение значений интенсивности флуоресценции от линейной
зависимости превышает 5 %. Значение этой концентрации принимают за верхнюю границу диапазона
линейности фотометрической шкалы слектрофлуориметра (по сульфату хинина);
- концентрацию, ниже которой отклонение значений интенсивности флуоресценции от линейной
зависимости превышает 2 %. Значение этой концентрации принимают за нижнюю границу диапазона
линейности фотометрической шкалы слектрофлуориметра (по сульфату хинина);
П р и м е ч а н и е - Построение и сопоставление зависимостей по 7.7.4, 7.7.5 и 7.7.6 рекомендуется прово
дить с использованием компьютерной программы, поддерживающей работу с графиками (типа Excel. MathCad,
Mattab. Origin и т.п.).
7