ГОСТ 33427—2015
Содержимое пробирок перемешиваютспомощью устройствадля смешивания (см. 6.5) и помеща
ютпробирки наводяную баню (см. 6.8) на 10 мин.
Затем в каждую пробиркудобавляют по 1см3рабочего раствора трипсина (см. 5.2.9). Содержимое
пробирок снова перемешивают с помощью устройства для смешивания (см. 6.5) и помещают центри
фужные пробирки обратно на водяную баню (см. 6.8). Через (600 *5)св пробирку № 2 добавляют по
1см3раствора уксусной кислоты (см. 5.2.6).
Содержимое пробирок перемешивают с помощью устройствадля смешивания и центрифугируют
в течение 10 мин при 1500 об/мин.
Эти растворы остаются стабильными в течение 2 ч.
Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости в каждой пробирке относительно дис
тиллированной воды на спектрофотометре (см. 6.6)придлине волны 410 нм в кюветах (см. 6.2).
Разница между оптической плотностью анализируемого раствора трипсина и оптической плот
ностью контрольного раствора трипсина (А, — АЬг) должна быть (0.380 ± 0.050) в. о. п. Если условие не
выполнено, то используют новыйтрипсин.
9.5 Измерение трипсинингибирующей активности
Для каждогоразведенияэкстрактапробы(см. 9.3) готовятанализируемыйи контрольныйраство
ры пробы. Подготовку анализируемых растворов пробы и соответствующих контрольных растворов
пробы проводятпараллельно, включая центрифугирование.
В центрифужные пробирки (по две пробиркидля раствора трипсина идля каждого разведения экс
тракта пробы) последовательно вносят по 5 см- реактива L-BAPA (см. 5.2.11), в пробирки с растворами
трипсина по3 см3дистиллированнойводы, в пробиркис растворами проб — по 1см3экстрактапроб ипо
2 см3дистиллированной воды. В пробирки, в которых готовят контрольные растворы трипсина и про
бы. вносят по 1см3раствора уксусной кислоты.
Содержимое пробирок перемешиваютспомощью устройствадля смешивания (см. 6.5) и помеща
ютпробирки в водяную баню (см. 6.8) на 10 мин.
Затем в каждую пробиркудобавляют по 1см3 рабочего раствора трипсина (см. 5.12). Содержимое
пробироксноваперемешиваютс помощьюустройствадля смешивания ипомещаютцентрифужные про
биркиобратно в водяную баню. Через(600 ± 5) с впробирки, в которыхготовят анализируемыераст
ворытрипсина и пробы, добавляют по 1см3раствора уксусной кислоты (см. 5.2.6).
Содержимоепробирок перемешиваютс помощьюустройствадля смешивания (см. 6.5). Затем все
пробирки с растворами центрифугируют в центрифуге (см. 6.10) втечение 10 мин при 1500 об/мин.
Полученные растворы остаются стабильными втечение 2ч.
Измеряютоптическуюплотностьнадосадочнойжидкостивовсехпробиркахна спектрофотометре
(см. 6.6)при длине волны 410 нм в кюветах(см. 6.2).
10 Обработка результатов
10.1 Вычисление содержания ингибитора трипсина в анализируемом растворе пробы
Содержание ингибитора трипсина/. %,ванализируемомрастворепробывычисляютпоформуле
у - ( А - ~ j g f ) ~ ( Ад -
Ад ) у
QQ
(1)
(Ar -Abr)
гдеАг— оптическая плотность анализируемогораствора трипсина, е. о. п.\
АЬг— оптическая плотностьконтрольногораствора трипсина, в. о. п.\
А. — оптическая плотностьанализируемогораствора пробы, в. о. п:,
А * — оптическая плотность контрольногораствора пробы, е. о. л.;
100 — коэффициентпересчета в проценты.
10.2
Вычисление коэффициента разведенияэкстракта пробы
Коэффициентразведенияэкстрактапробы f, вычисляют по формуле
^ _
100
■
100
(
2
)
1V ’
где 100— объемэкстрактаанализируемойпробы (см. 9.2). см3;
100 — объемразведвшюго экстрактаанализируемой пробы, см3;
V — объем, полученныйна основе данныхв соответствии сприложениемА. таблицаА. 1. см3.
5