ГОСТ 32630-2014
- метанол/0.01 М цитратный буферный раствор pH 6.0 (55%:45% в объемном соотношении).
4.3.2 Для приготовления раствора для элюирования должны использоваться:
- метанол квалификации для ВЭЖХ,
- дистиллированная вода или цитратный буферный раствор.
Раствор для элюирования перед использованием необходимо дегазировать. Элюирование
должно проводиться в изократическом режиме. Если смесь метанол/вода не подходит, могут быть
испробованы другие смеси органических растворителей с водой, например смеси этанол/вода или
ацетонитрил/вода. Для ионизируемых соединений рекомендуется для стабилизации pH использовать
буферный раствор вместо воды. Необходимо соблюдать осторожность во избежание осаждения
солей и порчи колонки, что возможно в случае применения некоторых вариантов смесей органической
фазы / буферного раствора.
4.3.3 Нельзя использовать добавки в виде ион-парных реагентов, потому что они могут
оказывать влияние
неподвижной фазы
на сорбционные характеристики неподвижной фазы. Такие изменения
могут быть необратимыми. По этой причине необходимо осуществлять
эксперименты с использованием добавок на отдельных колонках.
4.4 Растворы исследуемых веществ
Испытуемые и стандартные вещества должны растворяться в мобильной фазе.
5 Выполнение испытания
5.1 Условия проведения испытания
В процессе проведения эксперимента с использованием метода высокоэффективной
жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) должна регистрироваться температура. Для обеспечения
постоянных условий при проведении калибровки и анализа испытуемого вещества настоятельно
рекомендуется использование колоночного термостата для поддержания температурного режима.
5.2 Определение «мертвого времени»
tD
Для определения «мертвого времени» колонки могут использоваться два разных метода (см. п.
3.4).
5.2.1 Определение «мертвого времени» колонки с помощью
гомологических рядов химических соединений
Метод определения «мертвого времени» колонки с помощью гомологических рядов химических
соединений был признан пригодным для получения надежных и стандартизированных значений.
Дополнительная информация может быть получена из [11].
5.2.2 Определение «мертвого времени» колонки ^ с помощью инертных соединений, которые не
удерживаются колонкой
Данный метод основывается на введении в аналитическую колонку ВЭЖХ (типы колонок
приведены выше. п. 4.2.2) раствора формамида. карбамида (мочевины) или нитрата натрия, как
неудерживаемых соединений. Измерения должны выполняться, по крайней мере, дважды.
5.3 Определение времени удерживания
tR
Стандартные вещества должны быть выбраны способом, описанным в п. 3.2.4. Для определения
времени удерживания конкретного химического соединения в колонку ВЭЖХ вводят смесь
стандартных веществ, при этом предварительно должно быть установлено, что время удерживания
конкретного
Калибровка
стандартного образца не зависит от присутствия других стандартных образцов.
высокоэффективного жидкостного хроматографа для определения качественного и
количественного состава исследуемых веществ должна проводиться регулярно, по крайней мере, два
раза в день для учета непредвиденных изменений в производительности колонки. Для лучшего
выполнения эксперимента необходимо проводить
вещества, чтобы было подтверждено отсутствие
калибровку до и после ввода
дрейфа времени удерживания.
испытуемого
Испытуемые
вещества вводят в хроматограф ло-отдельности в количестве, не вызывающим перегрузки колонки, и
определяют время удерживания каждого из них.
5.4 Расчет коэффициента емкости (удерживания) колонки
к ’
Коэффициенты емкости (удерживания) колонки
к’
рассчитывают из значений «мертвого
времени» и времени удерживания
tR
выбранного стандартного вещества в соответствии с уравнением 4
(см. пункт 2.4). Значенияlog
к’
стандартных веществ откладывают на графике относительно
значений
Кх,
полученных на основании серии экспериментов по исследованию равновесного
состояния, приведенных в Таблицах А.1 и А.З Приложения А к настоящему стандарту. С помощью
этого графика значение log /(’испытуемого вещества затем используется для определения значения
log
Кос.
Если на основании фактических результатов следует, что logиспытуемого вещества
находится за пределами калибровочного диапазона, испытание следует повторить с использованием
других, более подходящих стандартных веществ.
5