ГОСТ 32526—2013
10.1 Пробоотбор
Пробы отбирают по ГОСТ Р 51592. Дополнительно руководствуются следующими
требованиями.
10.1.1 Пробы отбирают в чистые склянки из темного стекла. Склянки с пробами воды
снабжают этикетками, на которых указывают номер и вид пробы, дату и место отбора. Склянки
плотно закрывают крышками либо пробками, стараясь уменьшить время контакта проб с воздухом, а
также избегая встряхивания образцов.
10.1.2 В каждой точке отбора отбирают не менее двух проб воды объемом не менее 1 л.
10.1.3 Пробы можно хранить до пяти дней при температуре от 0 °С до 5 еС в защищенном от
света месте. Дополнительная консервация не требуется. Подготовку проб проводят при температуре
окружающего воздуха 18 °С - 22 °С. Перед обработкой по 10.2 пробы выдерживают при этой
температуре не менее 1 ч.
10.2 Экстракция дихлорметаном
I л образца воды переносят в делительную воронку вместимостью 2 л. Добавляют 100 г
хлорида натрия и встряхиванием добиваются его растворения.
Вносят в делительную воронку 60 мл дихлорметана, встряхивают в течение 5 мин. позволяют
смеси расслоиться и отделяют слой дихлорметана в колбу. Повторяют экстракцию два раза по 60 мл
дихлорметана и объединяют органические фазы. Объединенную органическую фазу выдерживают
над безводным сульфатом натрия, затем сульфат натрия отфильтровывают, помещают фильтрат в
круглодонную колбу и упаривают на ротационном испарителе при невысокой (25 еС) температуре до
объема - 5 мл. останавливают упаривание, в колбу добавляют 250 мкл тетрадекана и упаривание
продолжают до тех пор. пока дихлорметан не будет полностью упарен.
10.3 Очистка экстракта
Колонкуссиликагелемраспечатываютизаполняютгексаном,мини-колонкус
активированным углем также распечатывают и заполняют гексаном. Когда колонка с силикагелем
заполняется гексаном полностью и гексан начинает скапывать, окончание колонки присоединяют
давлением и закручиванием таким образом, чтобы внутреннее пространство в месте соединения
полностью было заполнено гексаном. Доливают несколько миллилитров гексана на колонку и
прикладывают давление 0,5 - 0.7 бар с помощью системы из набора SP2/3-ST. Гексан должен
скапывать из системы со скоростью 0.5 - 2 мл/мин. Заполненные гексаном колонки можно хранить, не
следует допускать высыхания колонки, для чего над силикагелем оставляют слой 2 - 5 мм гексана.
Растворители, элюирующиеся с колонки, собирают в емкости для сбора слива.
Раствор пробы в тетрадекане по 10.2 аккуратно переносят на колонку с силикагелем, колбу,
содержавшую пробу, ополаскивают2 мл гексана и гексан переносят на колонку. Спускают
растворитель так, чтобы его уровень почти достиг поверхности силикагеля, но силикагель еще не
контактировал с воздухом.
Промывают систему колонок сначала 10 мл гексана, подавая повышенное давление, доводя
уровень гексана до 2 - 3 мм поверхности силикагеля со скоростью 0.5 - 2 мл/мин. Повторяют
промывание два раза по 30 мл гексана.
Отсоединяют мини-колонку с активированным углем и промывают 6 мл смеси 1:1
толуол:гексан. Мини-колонку отсоединяют от резервуара и подсоединяют в обратном направлении,
затем также в обратном направлении элюируют образец под давлением с помощью 12 мл толуола.
Элюат собирают в стеклянную пробирку для упаривания. К элюату прибавляют 150 мкл
удерживающего раствора (Тетраэтиленгликоль-Тритон Х-100-метанол) из комплекта DF1 и упаривают
образец при температуре 70 °С - 90 °С в потоке азота. Когда весь толуол будет упарен, пробирку
центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об/мин и прибавляют 120 мкл метанола.
II Выполнение иммуноферментного анализа
Коммерчески доступные наборы для проведения иммуноферментного анализа включают
подробные инструкции по проведению измерений, которые могут отличаться от представленной и
которые может изменять производитель. Необходимо строго следовать предоставляемым
производителем инструкциям. Принципиальные этапы работы с комплектами DF1-12 или DF1-60
представлены ниже.
Реагенты выдерживают при комнатной температуре.
Трубки, содержащие антидиоксиновые антитела, промывают водой, добавляют по 500 мкл
раствора разбавителя для образца из комплекта. Прибавляют напрямую в слой жидкости,
находящийся в трубках, по 50 мкл раствора пробы или стандарта в метаноле по 10.3. Содержимое
трубок перемешивают интенсивным встряхиванием и инкубируют в течение 2 - 24 ч.
Затем содержимое трубок сливают, трубки заполняют 1 мл промывного раствора Тритона X-
100 (для приготовления раствора к 100 мл воды прибавляют 10 мкл Тритона Х-100 и тщательно
5