ГОСТ 7702.2.7 — 2013
7.3.15 Сроки и условия хранения культуральных сред - по ГОСТ ISO 11133-1.
8 Проведение исследований
8.1 Методы выявления бактерий рода Proteus
8.1.1 Выявление Н-форм бактерий рода Proteus
С помощью стерильной пипетки 0.5 см3исходного разведения анализируемой пробы продукта
или другого эквивалентного разведения вносят в конденсационную воду пробирок со свежескошенным
питательным агаром (см. 7.3.2. 7.3.3), не касаясь поверхности среды. Пробирки с посевами,
вертикально поставленные в штатив, инкубируют при температуре (37 ♦ 1) вС. Предварительный учет
результатов проводят через (24 ± 2) ч. окончательный - через (48 ± 2) ч инкубирования. После
инкубирования пробирки с посевами просматривают.
Н-формы бактерий рода Proteus из конденсационной жидкости растут вверх по поверхности
среды с образованием ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком.
8.1.2 Выявленио О-форм бактерий рода Proteus
С помощью стерильной пипетки по 0.2 см3исходного разведения анализируемой пробы продукта
или другого эквивалентного разведения наносят на поверхность среды Плоскирева (см. 7.3.4) в чашках
Петри и растирают по поверхности среды шпателем — изогнутой стеклянной палочкой. Чашку
закрывают крышкой и оставляют на 15 минпри комнатной температуредля адсорбирования
посевного материала. Инкубируют чашки с посевами дном вверх при температуре (37 ± 1) °С.
Предварительный учет результатов проводят через (24 ± 2) ч. окончательный - через (48 ± 2) ч
инкубирования. После инкубированиячашки Петри с посевами просматривают и отмечают на
обратной стороне дна чашки Петри типичные и (или) предполагаемые колонии.
О формы бактерий рода Proteus растут в виде прозрачных колоний с характерным запахом,
слегка подщелачивающих среду, с окрашиванием ее в желтый цвет.
8.2 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к бактериям рода
Proteus
Выявленные микроорганизмы с характерными культуральными свойствами (см. 8.1.1, 8.1.2)
исследуютна подтверждение принадлежности к бактериям рода Proteus.
Подтверждение принадлежности выросших микроорганизмов к бактериям рода Proteus
определяют по отношению к окраске по Граму. способности ферментировать глюкозу, образовывать
сероводород, дезаминировать фенилаланин.
8.2.1 Окраска по Граму и микроскопированио
Из выявленных культур готовят мазки, окрашивают по Граму - поГОСТ ISO 7218 и
микроскопируют.
При микроскопировании бактерий рода Proteus - полиморфные грамотрицательные палочки,
подвижные (перетрихи). не образующие спор и капсул.
8.2.2 Приготовление чистой культуры
Пересевы производят для получения чистых культур и использования их для биохимических
исследований.
Из каждой отобранной типичной или предполагаемой колонии (см. 8.1.1. 8.1.2) (не менее пяти
колоний) проводят пересев на поверхность скошенного мясо-пептонного агара (см. 7.3.2) или в мясо-
пептонный бульон (см. 7.3.6). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ♦ 2) ч.
Готовят мазки, окрашивают их по Граму, микроскопируют (см. 8.2.1). По мазкам, окрашенным по Граму,
проверяют чистоту выделенной культуры.
8.2.3Определение ферментации глюкозы и образования сероводорода
Для определения ферментации глюкозы и образования сероводорода чистую культуру
высевают в пробирки уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенного трехсахарного агара
(см. 7.3.7, 7.3.8) или питательного агара с глюкозой (см. 7.3.9).
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С. Предварительный учет результатов
проводят через (24 ± 2) ч, окончательный - через (48
±
2) ч.
Бактерии рода Proteus ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа, при этом
скошенная поверхность среды окрашивается в ярко-красный цвет, а в столбике появляется газ.
Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом столбик среды чернеет.
8.2.4 Определение дезаминирования фенилаланина
Для определения дезаминирования фенилаланина суточную чистую культуру высевают в
пробирку со скошенной средой для расцепления фенилаланина (см. 7.3.10). Посев делают штрихами на
поверхность скошенной среды. Инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (48 ± 2) ч.
3