ГОСТ Р 55275-2012
Если вирусная суспензия внесена непосредственно в приманку, то три
пробы препарата измельчают в стерильной фарфоровой ступке, отбирают ла
бораторную пробу массой 1,0 г, которую суспензируют в 9,0 см’ питатель
ной среды ДМЕМ, pH 7,2-7,4, получая разведение вируса 10*’, из которого
готовят десятикратные разведения с 10’2 по 10 " на питательной среде
ДМЕМ.
7.2.2.3 Проведение испытания
Из лунок планшета удаляют ростовую среду. Каждое разведение вак
цины, начиная с наибольшего (КГ7) вносят в объеме 0,1 см3 в четыре лунки
планшета с образовавшимся монослоем клеток (не менее чем в четыре кон
трольные лунки вносят среду ДМЕМ), после чего планшеты накрывают
крышкой и помещают ССЬ-инкубатор при температуре 37 °С и 5 %-ным со
держанием СО: на 48-72 ч. По окончании инкубации жидкость из лунок
планшета удаляют и вносят в каждую по 0,05 см’ 80 %-ного ацетона, охла
жденного до минус 20 °С. Через 2-5 мин ацетон удаляют и высушивают
планшеты при комнатной температуре в течение 20-30 мин.
Затем в лунки планшета вносят по 0,05 см3флуоресцирующего антира
бического глобулина в рабочем разведении, приготовленном в соответствии
с инструкцией по его применению, и инкубируют при температуре 37 °С в
течение 30 мин. Планшеты промывают три раза 0,9 %-ным изотоническим
раствором натрия хлорида и один раз дистиллированной водой, высушивают
при комнатной температуре и просматривают в инвертированном люминес
центном микроскопе.
7.2.2.4 Учет и обработка результатов
За положительные принимают лунки, в которых наблюдается харак
терное зеленое или желтовато-зеленое свечение. В контрольных лунках спе
цифического свечения наблюдаться не должно. Подсчитывают количество
положительных и отрицательных лунок в каждом разведении. Титр вируса
рассчитывают по методу Рида и Менча.
12