ГОСТ 31475—2012
7.2 Проведение экстракции
Навескуобразца, содержащегооколо0.2 г общегобелка, определенного предварительнометодом
Кьельдаля по ГОСТ 25011 (для мясных продуктов при массовойдоле общего белка 18 % масса навески
составляет 1.0 г), гомогенизируют в микроизмельчителе или путем растирания в ступке с 10
см3 ТРИС-буфера pH 6.8 или буфера для растворения белковых проб (в случае плохой
растворимости). Затем нагревают смесь до 75 °С и выдерживают при этой температуре 30 мин. Смесь
центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Прозрачную иадосадочную жидкость используют
для проведения электрофореза.
7.3 Приготовление смесей для градуировочного графика
Навески по 100.0 гсвинины (говядины или баранины, содержание животного белка не менее 18%)
смешиваютснавесками 1,5,10,15,20.50 и85 гсоевогоизолята. содержащего не менее85 %раститель
ного белка.
Точное содержание растительного и животного белка предварительно устанавливают методом
Кьельдаля по ГОСТ 25011. Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30
мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае
приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорасти
тельные смеси, массовая доля растительного соевого белка в которых относительно массовой доли
общего белка равна соответственно4.5 %; 19.1 %; 32,1 %; 41.5%; 48.6%; 70.2% и 80,0%.
7.4 Построение градуировочного графика
7.4.1Проводят денситометрирование выявленных характеристических белковых полос, соотве
тствующихмолекулярным массам 65000—75000. и автоматически, используя показанияденситометра,
вычисляют сумму площадей пиков, соответствующих белковым зонам с молекулярными массами
65000—75000.
Сумма площадей пиков, соответствующих белковым зонам с молекулярными массами
65000—75000. пропорциональна содержанию соевойдобавки в мясе и мясных продуктах.
Градуировочный графикстроятпорезультатамопределениямассовойдолисоевыхбелковвдвух
компонентныхмодельныхмясорастительныхсмесях, приведенным в таблице 2.
Т а б л и ц а 2
Сумма площадей ликов
на электрофореграмме в
областимолекулярных
масс 65000—75000. уел. ед.0.12675100145175190225255290
Массовая доля соевых
белков в анализируемом
образце. %0102030405060708090
График, построенный поданным таблицы 2, представлен в приложенииА.
8Проведение исследования
8.1 Проведение электрофореза
8.1.1 Всоответствии с инструкцией поэксплуатациисобираюткамерудля проведения вертикаль
ногоэлектрофореза.
8.1.2 Подготовка кассеты и заполнение ее нижним сепарирующим (рабочим) и верхним
формирующим гелем
Два чистых стекла, входящих в комплект камеры для электрофореза, обезжиривают этиловым
спиртом. Затем их закрепляют в кассету с заданным расстоянием между стеклами 1 мм. образуя про
странство для заливки геля размером 115 х 115 х 1мм. Затем осторожно по краю стекла через наконеч ник
от пипеточногодозатора заливаютсоставдля нижнего сепарирующего геля на три четверти высоты
стекла. В кассетупо стенке наповерхностьзалитого геля приливаютдистиллированную водудля поли
меризации геля и выравнивания верхнего края его поверхности. После полимеризации граница между
гелем иводойдолжна бытьчетко видна. Процесспроисходитпри температуре20 °Свтечение 1 ч. Увели
чение времени полимеризации приводитк получениюболее плотнойсеткигеля ивозрастанию времени,
необходимогодля проведения электрофореза.
5