ГОСТ Р 53912—2010
Окончание таблицы 1
Тест-купьтура
Время
ч
Учет интенсивности щеточного дыхания
Разведенке тест-культуры (5.1.3.3)
1:21:4
1:8
1:161:321:641.1281.2561:5121:1024
В.m ycoides 5371
♦
♦
♦++
♦
♦
---
M icrococcus
luteum А Т С С 93411♦♦++
♦
----
П р и м е ч а н и е (♦) — полное обесцвечивание метиленового синего. (-> — отсутствие обесцвечивания.
Дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культур восстанавливают метиленовый
синий ванаэробных условиях, и содержимое пробирок, имеющее синий цвет, обесцвечивается. Разве
дение тест-культуры в последней пробирке с обесцвеченным метиленовым синим (+) принимают за
«рабочую дозу». Функциональная активность дегидрогеназ тест-культур стабилизируется через сутки
после получения смыва, который хранится вхолодильнике втечение одной недели. Поэтому «рабочую
дозу» первый раз определяют через сутки, а затем — через три дня.
Максимальное разведение тест-культур, вызывающее полное обесцвечивание метиленового
синего и выявленное через один час инкубации в термостате при температуре 37 °С. принимают за
«рабочую дозу».
В среднем, «рабочую дозу» тест-культур определяют:
для Bacillus subtilis. вар. 6633в разведении 1:256:
- Bacillus subtillis, вар. L2
- Bacillus mycoides 537
- Micrococcus luteum АТСС 9341
» 1:512;
» 1:128;
»1:64.
6 Определение антибиотиков в анализируемой пробе
6.1 Подготовленные к исследованию анализируемые пробы по 5.1.1 в объеме 0,5 см3 вносят в
пробирки с таким же (0.5 см3) объемом мясо-пептонного бульона и тщательно перемешивают. Во все
пробирки добавляют 0.5 см3 взвеси, содержащей двойную «рабочую дозу» тест-культуры (5.1.3.3).
Последняя пробирка не содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной
активности тест-культуры.
Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 3-часовую экспозицию тест-культуры с испы
туемым субстратом.
После этого в каждую пробирку вносят по 2 м3 растопленного и охлажденного до температуры
(45 i 1) “С мясо-пептонного агара с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают
и вновь инкубируют в термостате при температуре (37 ± 1) °С в течение 1—2 ч.
6.2 Учет результатов определения антибиотиков
6.2.1 При отсутствии в испытуемых пробах антибиотикадыхательные ферменты бактериальных
клеток тест-культур не нарушаются и восстанавливают (т. е. обесцвечивают) в анаэробных условиях
метиленовый синий.
6.2.2 Вконтрольной пробирке, где отсутствует анализируемая проба, также происходит обесцве
чивание в течение 1—2 ч наблюдения в термостате при температуре (37 ± 1) °С (контроль фермента
тивной активности бактериальных клеток тест-культуры).
6.2.3 При наличии антибиотика в анализируемой пробе дыхательные ферменты бактериальных
клеток блокируются, метиленовый синий не восстанавливается, цвет остается синим.
4