ГОСТ Р 53912—2010
5.1.1.3 Яйца, меланж
Яйца или меланж, предназначенные для исследования, предварительно нагревают на водяной
бане при температуре (65
1
1) °С в течение 10—15 мин до коагуляции белка, затем содержимое яиц
или меланж тщательно перемешивают и отбирают пробу для анализа массой не менее 10 г.
5.1.1.4 Мясо и субпродукты
Мясо и субпродукты (печень, почки, язык и т. д.) скота и птицы, предназначенные для исследова
ния, измельчают ножницами или при помощи мясорубки или гомогенизатора, затем 10 г пробы мышеч
ной ткани помещают в чашку Петри и дают стечь тканевому соку. Тканевый сок в объеме не менее
10 см3 переносят в пробирку.
5.1.2 Термическая обработка проб пищевых продуктов
Перед проведением исследования пробирку с пробой, отобранной по 5.1.1, помещают в водяную
баню с температурой (60 ± 1) °С. Время прогревания 30 мин отмечают от момента достижения постоян
ной температуры внутри пробирки.
5.1.3 Тест-культуры для определения антибиотиков
Тест-культурами служат вегетативные формы спорообразующих и неспорообразующих культур:
Bacillus subtilis, вар. 6633; Bacillus subtilis. вар. L2; Bacillus mycoides 537; Micrococcus luteum ATCC 9341,
обладающих высокой чувствительностью к антибиотикам.
Для пенициллина и стрептомицина используют следующие тест-культуры — Bacilus subtilis,
вар. 6633; Basilus mycoides 537 и Micrococcus luteum ATCC 9341, для тетрациклина — Bacillus subtilis,
вар. L2.
Музейные штаммы вегетативных форм тест-культур хранят в пробирке со столбиком полужидко
го 0,4 %-го питательного агара.
5.1.3.1 Приготовление тест-культур
Вначале тест-культуру рассеивают на чашки Петри с 2 %-ным мясо-пептонным агаром для полу
чения отдельных колоний. Чашки ставят на (20 ± 3) ч в термостат при температуре (37 ± 1) °С. После
чего мелкие колонии отсевают в пробирки с 2 %-ным мясо-пептонным скошенным агаром и вновь инку
бируют в термостате при температуре (37 ± 1) °С в течение (20 ± 3) ч.
Микробную взвесь готовят путем смыва физиологическим раствором суточной культуры со ско
шенного агара. Важно, чтобы смыв культур был абсолютно гомогенным и не содержал комочков.
Срок хранения полученной взвеси в холодильнике при температуре (4 ± 1) вС — 7 дн.
5.1.3.2 «Рабочая доза» тест-культур
«Рабочая доза» тест-культуры — наибольшее разведение суспензии, вызывающее обесцвечи
вание метиленового синего вопределенное время в термостате при температуре (37
а
1) °С. При этом
учитывают, что время обесцвечивания метиленового синего обратно пропорционально количеству
клеток тест-культуры в смыве. Время постановки реакции равно одному часу. Оно выявляет в суспен
зиях различной плотности одну и ту же клеточную нагрузку для каждой тест-культуры. «Рабочую дозу»
тест-культур устанавливают по дегидрогеназной активности клеток.
5.1.3.3 Приготовление «рабочей дозы» тест-культуры
Полученную взвесь тест-культуры (5.1.3.1) титруют путем последовательных разведений в 1 см3
питательного бульона всоотношении 1:2. Пробирки с тест-культурой встряхивают и помещают на 3 ч в
термостат при температуре (37 ± 1) °С. Затем для создания условий, близких к анаэробным, в каждую
пробирку вносят по 2 см3растопленного иохлажденногодо температуры (45 * 1) °С 1%-ного питатель
ного агара с метиленовым синим и глюкозой (оба ингредиента асептично вносят в растопленный 1
%-ный питательный агар из расчета: на 100 см3среды 0.4 см30,5-ного водного раствора метиленово го
синего и 1 см340 %-иого раствора глюкозы). Пробирки встряхивают и вновь инкубируют в термоста те
при температуре (37 ± 1) °С в течение 1—2 ч, после чего учитывают результат (таблица 1).
Т а б л и ц а 1 — Определение «рабочей зоны» тест-культур
Тест-культура
Время,
ч
Уче! интенсивности клеточною дыхания
Разведение тест-культуры (5.1.3.3)
1:2
1:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024
В .subtilis,
вар. 6633
1
4444
♦
444
В .subtilis. вар. L2
14
44
♦
4444
-
3