ГОСТ 30624-98
5.1.2 Очистка дютилового эфира
В склянку с коркопой пробкой взвешивают (5,0±1,0) г марганцовокислого калия и (10.0±1,0) г
гилроокиси калия, заливают I дм’диэтилового эфира и остаатяют на сутки в темпом месте. Затем
эфир перегоняют при температуре 33—35 "С.
5.1.3 Приготовление сухогохлороформа
Хлороформ сушат над хлористым кальцием в течение суток, затем перегоняют при температу
ре 60—61 ’С и хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике не более
1 мес.
5.1.4 Приготовление спиртового раствора гидроокиси катя концентрации с (КОН) =■2 мол ь/длг’
(120±5) г гидроокиси калия растворяют в I дм* спирта. Полученный раствор хранят в закрытом
сосуде в холодильнике. Срок годности спиртового раствора гидроокиси калия — 1мес.
5.1.5 Приготовлениераствора треххюристои сурь.чы (реагент Карр-Прайса)
В конической колбе взвешивают (20,0+0,5) г треххлористой сурьмы. Результат взвешивания
записывают до второго десятичного знака. Добавляют 100 см* хлороформа и растворяют, нагревая на
водяной бане (температурой не выше 50 *С), периодически встряхивая. Раствор охлаждают, добав
ляют 2—3 см3уксусного ангидрида, колбу плотно закрывают и остаатяют на 16—24 ч при
комнатной температуре для отстаивания. Затем верхнюю прозрачную часть раствора осторожно
сливают через бумажный фильтр в темную склянку с притертой пробкой. Раствор выдерживают
сутки при комнат ной температуре. Растпор треххлористой сурьмы хранят в холодильнике не более
1 мес.
5.1.6 Пригото&гение стандартного раствора витамина D
250 мг эргокальциферола растворяют в 10 см3 хлороформа. Раствор содержит 1000 м. е. витами
на D в 1см* хлороформа (1 м. е. витамина Осоответствует 0,025 мкг эргокальциферола).
Срок годности стандартного раствора витамина О - 1сут.
5.2 П о с т р о е н и е г р а д у и р о в о ч н о г о г р а ф и к а
Интенсивность окраски хлороформного раствора витамина D после проведения колориметри
ческой реакции с треххлористой сурьмой измеряют в фотоколориметре или спектрофотометре при
длине волны 480-530 нм.
Для построения градуировочного графика помещают в кювету рабочей длиной 10 мм 1,0: 0,75;
0,50 и 0.25 см’ хлороформного раствора витамина D, доводят хлороформом до объема 1см’, затем
добавляют 6 см* расгвора треххлористой сурьмы и три капли хлористого ацетила. Отношение
объе мов испытуемого раствора к раствору хлористой сурьмы должно составлять 1:6.
Измерение оптической плотности каждого раствора проводят через 4 мин после добавления
последнего реактива. По полученным значениям строят график зависимости оптической плотности
от концентрации витамина D. График предстапляет собой прямую линию.
Измерение оптической плотности продукта колориметрической реакции следует проводить
быстро в течение 5—6 с.
П р и м е ч а н и е — Градуировочный график строится для каждого спектрофотометра или фотоатсктро-
кодориметра и проверяется при смене партий реактивов и приборов путем измерения оптической плотности
стандартных растворов двух разных концентраций.
6 Проведение измерения
(0.5+0,05) г растительного масла взвешивают в колбе. Результат записывают в граммах до
четвертого десятичного знака. Добавляют 50 см’ спиртового раствора гидроокиси калия концентра
ции с (КОН) = 2 моль/дм’.
Колбу соединяют с обратным воздушным холодильником и смесь кипятят на водяной бане в
течение 30 мин. После этого содержимое колбы охлаждают и количественно переносят в делитель
ную воронку, дважды ополаскивая колбу порциями дистиллированной воды по 50 см1. Неомыляе
мые вещества экстрагируют трижды порциями этилового эфира по 50 см3.
Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку и промывают дистилли
рованной водой порциями 50—ИХ) см3до нейтральной реакции по фенолфталеину.
Промытую эфирную вытяжку’ сливают в сухую колбу, добавляют (10+1) г сернокислого на
трия и остаатяют на 30 мин в темном месте, периодически взбалтывая. Затем содержимое колбы
фильтруют через бумажный фильтр. Сернокислый натрий в колбе и фильтр промывают этиловым
эфиром. Эфир собирают в колбе и отгоняют в вакууме при температуре не выше 30 *С. Остаток в
3