С. 3 ГОСТ 23481-79
3.3. Приготовление спиртового раствора эозина с массовой долей I
%
1гспирторастворимого эозина растворяют в 100см3этилового спирта с массовой долей 70 %.
3.2, 3.3. (Измененная редакция, Изм. № 2).
3.4. Приготовление водного раствора метиленовой сини с бурой
2 гбуры и I г метиленовой сини растворяют в 100 мл подогретой дистиллированной воды. Рас твору
дают один раз вскипеть и оставляют на длительное время (месяц и больше) для созревания.
3.5. Приготовление смеси для окрашивания срезов
Смесь составляют из трех растворов: первого —спиртового раствора метиленовой сини с мас
совой долей 1
%:
второго —спиртового раствора эозина с массовой долей 1
%:
третьего —водного
раствора метиленовой сини с бурой.
Сливают равные объемы первого и второго растворов (по 10—15 капель каждого), 5—10 капель
третьего раствора и дистиллированную воду в двукратном отношении к общему объему трех
растворов.
Смесь готовят непосредственно перед употреблением.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
3.6. Подготовка пробы к анализу
3.6.1. Из пробы вырезают кусочки 0.5 см2 на всю глубину ее, прикрепляют к ним этикетку в
соответствии с п. 1.4. помешают их в колбу с раствором формалина с массовой долей 10 %, взятым в
десятикратном объеме, и подогревают в вытяжном шкафу до появления пузырьков воздуха. Содер
жимое слегка встряхивают и вновь подогревают до появления пузырьков. Эту операцию повторяют 3
раза.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
3.6.2. Формалин сливают, в колбу вставляют стеклянную воронку и промывают пробы холод
ной проточной водой в течение 5—7 мин.
3.6.3. Промытые пробы помешают на столик замораживающего микротома и ориентируют
его так, чтобы в срез попадали все слои пробы по глубине, а мышечные волокна по своей длине рас
полагались параллельно лезвию ножа. Срезы готовят толщиной 15—30 мкм. Почки и легкие
ориентируют только по глубине.
3.6.4. Срезы осторожно снимают кисточкой с лезвия ножа и помешают в чашку Петри с дистил
лированной водой на несколько секунд для распрямления. Под неповрежденные среды подводят пред
метное стекло, предварительно покрытое смесью белка яйна с глицерином (2:1). поочередно извлекают
срезы из воды с помощью препаровальной иглы и расправляют их на предметном стекле. Выравненные
срезы аккуратно накрывают сложенной в три слоя фильтровальной бумагой и. нажимая пальцами,
приклеивают их к предметному стеклу.
Предметные стекла со срезами помешают в чашку Петри.
3.6.5. Наклеенные срезы окрашивают смесью метиленовой сини с эозином. Красящую смесь
набирают в пипетку и наносят ровным слоем на срезы, находящиеся на предметном стекле. Через
20—30 мин срезы промывают дистиллированной водой из пипетки.
Для дифференцирования срезы обрабатывают водой, подкисленной уксусной кислотой
(1—2 капли кислоты на 100 см3воды) в течение 1мин, после чего их промывают дистиллированной
водой в течение 5—10 мин.
3.6.6. После окрашивания последовательно наносят пипеткой на срезы обезвоживающие рас
творы, составленные из смеси ацетона с ксилолом и ксилола по табл. 1.
Т а б л и ц а I
Номер раствора
Количество частей ацетона
Количество частей ксилола
Продолхн телытость
обработки
1
2
3
4
95
70
30
—
5
30
70
100
4 0 -6 0 с
5—6 мин
5—10 мин
5 мин
Остатки растворов со срезов на предметных стеклах удаляют фильтровальной бумагой.
3.6.7.Окрашенные и обезвоженные срезы заключают нанесением капли пихтового бальзама
и покрывают покровным стеклом с помощью прямой препаровальной иглы или анатомического
пинцета так, чтобы избежать образования пузырьков воздуха между предметным и покровным
стеклами.
На готовый препарат наклеивают этикетку с указанием номера пробы.