ГОСТ 14109-82 С. 4
овления сапного эмульсин-антигена в течение года.
асности, утвержденные в установленном порядке.
аыении 0.2 МПа в ечение 2 ч
яной оанс при 37 *С и тщательно взбалтывают
Ланолин безводный
Натрий хлористый х.ч по ГОСТ 4233—77.
Фенол по НТД.
Глюкоза кристаллическая гид ратная по ГОСТ 975—88.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72.
3.6.2—3.7.1. (Измененная редакция, Изм. № 1).
3.7.2. Подготовка к испытанию
3.7.2. !. Получение бактериальной массы возбудителя сапа дм изготовления эмульсин-антигена
Для получения бактериальной массы культуру возбудителя сапа выращивают на МПА с 2—4 %
пиперина вплоских матрацах pH среды 6.8—7,0. Посев проводятсуспензией двухсуточной культуры
возбудителя сапа, выращенной в пробирках на МПА с 2—4 % глицерина и смытой стерильным
физиологическим раствором в количестве 10-12 ем’. Суспензией культуры из каждой пробирки
засевают по одному матрацу, для чего над пламенем горелки переливают содержимое пробирки в
матрац, затем покачиванием его распределяют суспензию по всей поверхности питательной среды.
Выращивание культуры проводят при 37 ’С в течение 4 сут. затем все матрацы просматривают
визуально в проходящем иотраженном свете Матрацы сослабым ростом культуры или загрязненные
посторонней микрофлорой на используют.
Вматрацы с чистой культурой вносят над пламенем горелки по 50—60 см’ стерильного физиоло
гического раствора, содержащего 0.5 % фенола, и выдерживают 30 мин в наклонном положении,
обеспечивающем смачивание всей поверхности посев;» Затем покачиванием матраца смывают культуру
с поверхности агара и сливают в отдельный чистый матрац через воронку с одним сдоем марли.
11слученную взвесь культуры стерилизуют автоклавированием при давлении 0,2 МПа втечение 30 мин.
Суспензию культуры возбудителя сапа проверяют на стерильность посевом по 0.3—0,5 см’ на
МПА. МПА с 2 -4 % глицерина. МП Б. среду К»пт-Тароиим и среду Сабуро - по 3 пробирки каждой
среды, и выдерживают в течение 10 сут при 37 *С. а посевы на среду Сабуро —при 20-22 *С.
изгот
Стерильная суспензия культуры должна храниться при 6-8 *С и может быть использована для
безоп
При получении бактериальной массы возбудителя сапа должны соблюдаться правила
техники
3.7.2.2. Изготовление сапного эмульсин-антигена
при д
Легкое минеральное
т
масло для
.
вакцин и ланолин безводный стерилизуют автоклавированием
Для изготоатсния антигена смешивают в стакане гомогенизатора 85 см3минерального масла с
15см ланолина, разогретого до жидкого состояния. Затем добаатяют 50 см3взвеси бактериальной
массы возбудителя сапа, содержащей 37,5 г культуры.
Взвесь сапной культуры готовят следующим образом, в стерильную центрифужную пробирку,
предварительно взвешенную на аналитических весах, вносят бактериальную массу, полученную в
соответствии с п. 3.7.2.1, и центрифугируют при 6000-8000 об/мин в точение 15 мин. Нааосадочную
жидкость сливают и пробирку вновь взвешивают. Осадок разводят стерильным физиологическим
раствором с таким расчетом, чтобы в 1см3взвеси содержалось 0,75 г культуры.
Смесь масла, ланолина и взвеси сапной культуры гомогенизируют при 5000 об/мин в течение
5 мин и переливают в стерильные флаконы для медицинских препаратов.
Всю работу по изготовлению эмульсин-антигена проводят с соблюдением условий стерильности.
Готовый антиген проверяют на стерильность посевом по 0.3-0.5 см3на МПА, МПА с 2-4 %
глицерина. МПБ, среду Китг-Тароцци и среду Сабуро - по 3 пробирки каждой среды. Посевы
инкубируют в течение 10 суг при 37 *С, а на среде Сабуро - при 20-22 *С.
в вод
Антиген может сохраняться при 6—8 *С втечение года. Перед применением антиген нагревают
3.7 2.3. Сенсибилизация морских свинок
Морских свинок-альбиносов или с белым окрасом на боках массой нс менее 400 г каждая
сенсибилизируют
ь
введением
я
0,1 см
о
антигена в заднебедренные мышцы Через месяц животные
могут быть испол зованы дл контр ля маллеина.
ором.
Морских свинок используют 5—6 раз с месячным интервалом при условии сохранения у них
при предыдущем испытании хорошо выраженной чувствительности к маллеину в разведении 1:50.
Животных, нс имеющих или утративших чувствительность к этой дозе препарата, уничтожают.
3.7.3. Проведение испытания
раств
Испытуемую серию маллеина берут в разведении 1:5 и 1:50 стерильным физиологическим
Готовят основной раствор рефсрснс-препарата в соответствии с указанием, имеющимся на
этикетке ампулы (флакона), затем разводят его стерильным физиологическим раствором 1:5 и 1:50.