ГОСТ
2 S m
— «3 Сгр. 3
каждую пробирку с разбавленной сывороткой добавляют но 0 4 см’
вируса и инкубируют нх в течение 60 мин при температуре 37°С.
Каждой полученной смесью в объеме по 0,2 см3 заражают че
тыре пробирки с культурой клеток, из которой удалена питатель
ная среда.
Пробирки инкубируют в течение 30 мин при темперапре 37сС
после чего в каждую вносят по 0,8 см3поддерживающей среды, за
тем продолжают инкубирование в течение 48- 96 ч.
СЛ>ЖаТ 5 пробнРок с незаряженной культурой клс-
без телячьей сыворотки.
ои иии клеток в
1
см3 поддерж ающе среды, о ржащей 30 %
2.2.2. Микрометод
ды
Во все лунки пластин вносят по 0,05 см3 поддерживающей сре
С помощью петель готовят двукратные разбавления испытуе-
^,Ь*(?_?Ы®°Р0Т0К в требуемом объеме и ы соотношении от
1:4
до
1:"®;.Затем во все лунки с разбавленными сыворотками вносят
по и,05 см вируса, предварительно разведенного в поддерживаю
щей среде так, чтобы 0.05 см3содержало 100 ТЦДво-
После 60 мин инкубирования при комнатной температуре во все
лунки вносят по 0,05 см5клеточной суспензии вюричных пассажей
Ж
и
о п П0ЧеК ИЛИ, ^товидкых
ив
желез
й
свиней
с
в
де
концентрации
инактивированной телячьей сыворотки.
Пластины с культурами выдерживают в термостате с атмос
ферой. содержащей 5 % углекислого газа, в течение
4
суг при тем
пературе 37 С.
Контролем служат восемь лунок с незаряженной культурой.
2.3. Об р аб о т к ар е з у л ь т а т о в
Реакцию нейтрализации учитывают через 48—96 ч только при
условии развития цитопатнчсского действия (ЦПД) в пробирках,
«инфицированных вирусом в разведениях 10~* и 10-3, и в пробир
ках, «инфицированных смесью вируса с отрицательной сывороткой,
а также при отсутствии ЦПД в пробирках или лунках, инифицн-
рояанны.х смесью вируса со специфической сывороткой, и в про
бирках или лунках, не зараженных вирусом.
Титр внруснейтрализующих антител представляет собой наи
большее разбавление сыворотки, которое предотвращает развитие
цитопатнчсского действия в 50 % зараженных пробирок или
лунок
.
Положительными считают сыворотки, которые полностью нейт
рализуют 100 ТЦДзо вируса, по крайней мерс в разбавлении 1:4.