ГОСТ ISO 7358—2015
7.2.1.1.2 Количество внутреннегостандарта
Количествокумарина (внутреннегостандарта), добавленногов пробу, считают подходящим, когда
площади пиков бергаптена (в масле) и кумарина приблизительно равны на хроматограммах. Для опре
деления этого количества вводят в колонку ВЭЖХ (например. 10 мм3) раствор, содержащий данное
количество (например, 10 мг) кумарина (см. 4.2), растворенного в хлороформе (см. 4.3.1, например,
10см3).Затем вводят такойжеобъем раствораанализируемогоэфирногомасла, разведенного вхлоро
форме (см. 4.3.1). Регулируют массовые концентрации обоих растворов так, чтобы получить
сопоставимые площади пиков.
7.2.1.2 Коэффициент чувствительностидетектора К
Готовятградуировочный раствор. В мерной колбе (см. 5.2) подходящегообъема взвешивают 20мг
кумарина (см. 4.2)с точностьюдо 0.1 мг. Втакойже мерной колбе взвешивают 10 мгбергаптена (см. 4.1)
приблизительно с точностью до 0.1 мг и растворяют оба компонента примерно в 20 см3 хлороформа
(см. 4.3.1).
Вводятподходящее количество (см. 7.2.1.1) градуировочногораствора так. чтобы остаться внутри
диапазона чувствительностидетектора.
Измеряют площади пиков на хроматограмме. Типичная хроматограмма стандартных веществ
представлена в приложении А.
Вычисляюткоэффициентчувствительностидетектора К по формуле (1):
™
r
s
s
А
К
=
m,
_4|
н
(1)
П р и м е ч а н и е — В ISO 8432 данная формула эквивалентна следующей:
КгmR
тв -Ан
где mR — масса бергаптена (контрольное вещество) (см. 4.1). добавленная к раствору, мг;
т£ —
масса кумарина (внутренний стандарт) <см. 4.2). добавленная к раствору, мг;
Aff — площадь пика, соответствующая бергаптену (стандартное вещество) (см. 4.1). в единицах измерения
интегратора;
А
е
— площадь пика, соответствующая кумарину (внутренний стандарт) (см. 4.2). в единицах измерения интег
ратора.
7.2.1.3 Определение бергаптена
Готовят испытуемый раствор в мерной колбе (см. 5.2) подходящего объема (например, 15 см3).
Взвешивают с точностью до 0.1 мг подходящее количество кумарина (m,s) (приблизительно 10 мг), как
определено в7.2.1.2. ипорцию пробыэфирногомасладля испытания(ms)так,чтобы получиласьхрома
тограмма с сопоставимыми площадями пиковдля бергаптена и кумарина.
Добавляют хлороформ (см. 4.3.1, приблизительно 8 см3) и аккуратно встряхивают, чтобы раство
рить кумарин.
Необходимо приготовить столько разведений испытуемого раствора, сколько необходимо для
получения хроматограммы с сопоставимыми площадями пиков бергаптена и кумарина, поскольку
содержание бергаптена в эфирных маслах неизвестно (полностью или частично очищены от бергапте
на). Выбираютмерную колбутакой вместимости, чтобы поместилисьнеобходимоеколичество кумарина
ихлороформа.
Используятеже условияпроведенияанализа ВЭЖХ. установленные в 7.2.1.1. вводятподходящее
количество испытуемого раствора так, чтобы остаться внутри диапазона чувствительностидетектора.
Измеряют площади пиков хроматограммы.
Измеряютизаписываютплощадипиковхроматограммы, соответствующихбергаптену(Ах) икума
рину (AIS).
Типичнаяхроматограмма представлена в приложенииА.
7.2.2 Метод внешнего стандарта для эфирных масел с массовой долей бергаптена
от 0,0001% до 0,001%
Следуют процедуре для метода «внешнегостандарта», установленной в ISO 8432.
гдеmR— масса бергаптена (контрольное вещество) (см. 4.1). добавленная к раствору, мг;
масса кумарина (внутренний стандарт) (см. 4.2). добавленная к раствору, мг;
площадь пика, соответствующая бергаптену (стандартное вещество) (см. 4.1), в единицах
измерения интегратора;
площадь пика, соответствующая кумарину (внутренний стандарт) (см. 4.2). в единицах изме
рения интегратора.
з