ГОСТ 33643— 2015
Приложение В
(рекомендуемое)
Культивирование амбарных клещей
Hypoaspis (Gcolaolaps) aculoifer
и синхронизация культуры
Культивирование
Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
Культуры могут содержаться в пластиковых сосудах или стеклянных банках, заполненных смесью гипса’
угольного порошка (9:1). При необходимости гипс увлажняют добавлением нескольких капель дистиллированной
или деионизированной воды. Оптимальная температура культивирования составляет (20 ± 2) *С, цикл сэет/темно-та
не важен для этого вида. Кормовым объектом могут быть клещи
Typrophagus putrescentiae
или
Caloglyphus
sp. (с
амбарными клещами следует обращаться с осторожностью, поскольку они могут вызвать аллергию у людей), но
также в качестве корма подходят нематоды, энхитреиды и коллемболы. Их источники регистрируют. Развитие
популяции начинается с одной самки, поскольку самцы развиваются в неоплодотворенных яйцах. Поколения в ос
новном перекрываются. Самка живет не менее 100 сут и за время своего существования может отложить примерно
100 яиц. Максимальный уровень яйцекладки имеет место в период между 10-40 сут (после развития до взрослой
стадии) и составляет 2,2 яиц самка’1д е н ь 1. Время развития от яйца до взрослой самки равняется примерно
20 сут при температуре 20 *С. Следует поддерживать и хранить заранее более чем одну культуру.
Культивирование
Typrophagus pulrescentiae
Клещей содержат в стеклянном сосуде, заполненном мелким порошком пивных дрожжей, который поме
щают в пластмассовое ведро, заполненное раствором KN03 во избежание выхода насекомых. Амбарных клещей
помещают поверх порошка. Затем их тщательно перемешивают с порошком (который меняют два раза в неделю)
с помощью шпателя.
Синхронизация культуры:
Клещи, используемые в испытании, должны быть одинакового возраста (около 7 сут после достижения
взрослой стадии). При температуре 20 "С культивирование проводится следующим образом:
- самок переносят в чистый культуральный сосуд и добавляют достаточное количество корма;
- после кладки яиц в течение двух-трех суток самок удаляют:
- для испытания отбирают взрослых самок на 28-35 сут после внесения взрослых самок в чистые сосуды
для культивирования.
Взрослых самок можно легко отличить от самцов и других стадий развития по их крупному размеру, раздутой
форме и коричневому спинному панцирю (самцы меньше и плоские), неполовозрелые особи бело-кремового цвета.
Развитие клещей при температуре 20 ’С происходит по схеме, приведенной ниже (см. рисунок 1): яйцо — 5 сут, личин ка
— 2 сут. протонимфа— 5 сут.дейтонимфа — 7сут. период перед яйцекладкой у самок 2 сут. Затем клещи - взрослые.
2В<угЭбоуг
Испытуемых взрослых самок извлекают из синхронной культуры и вносят в испытуемые сосуды на 28 и 35 сут
после начала яйцекладки самками (т. е. 7-14 сут после достижения взрослой стадии). Такая процедура гаранти
рует, что тестовые организмы уже прошли период перед яйцекладкой и были оплодотворены самцами, которые
также находятся в культуральном сосуде. На основе наблюдений за лабораторными культурами можно
предпо ложить. что самки спариваются сразу или вскоре после развития до взрослых особей, если
присутствуют самцы (Ruf. Vaninnen. pers. obs.). Период 7 сут выбран для упрощения внедрения метода в
лабораторную практику и для нивелирования индивидуальных различий в развитии в популяции клещей.
Яйцекладка начинается с такого же количества самок, какое в конечном итоге требуется (если, например, для
испытания требуется 400 самок, то не менее чем 400 самок откладывают яйца в течение 2-3 сут). Не менее 1200
яиц должны быть отправной точкой для синхронной популяции (соотношение полов примерно 0.5: смертность
примерно 0.2). Для предотвращения канни бализма целесообразно, чтобы в одном сосуде находилось не более
20-30 самок, откладывающих яйца.
12