ГОСТ 33042—2014
8.2.3 Содержание воды в почвенном субстрате поддерживают, периодически взвешивая
тестовые сосуды (без крышек). Потери влаги восполняют деионизированной водой. Содержание
воды может варьироваться в пределах 10% от исходного содержания в начале теста.
8.3 Кормление
8.3.1 Любой качественный корм годится для поддержания масса червей в течение теста. Опыт
показывает, что молотый овес, коровий и конский навоз - подходящий корм. Следует удостовериться,
что коров и лошадей, чей навоз используется, не подвергали воздействию таких веществ, как
стимуляторы роста, нематициды или аналогичные ветеринарные препараты, которые могут оказать
вредное воздействие на дождевых червей во время теста. Рекомендуется самостоятельно
собранный коровий навоз, так как опыт показал, что продаваемый навоз, используемый как
удобрение, может нанести вред червям. Навоз перед использованием должен быть воздушно-сухим,
тонко растертым и пастеризованным.
8.3.2 Каждую свежую партию корма следует опробовать на нетестируемых червях, чтобы
удостовериться в подобающем качестве корма. Рост червей и количество коконов не должно
уменьшаться при использовании новой партии корма (как описано в условиях руководства ОЭСР 207 (4)).
8.3.3 Корм дают в первый день после посадки червей и обработки почвы тестируемым
веществом. В каждый сосуд добавляют 5 г корма. В оставшиеся 4 недели теста кормление не
производят. Примерно 5 г корма распределяют по поверхности почвы в каждом сосуде и увлажняют
деионизированной водой (около 5-6 мл на сосуд). В дальнейшем корм дают раз в неделю в течение
4-х недельного теста. Если весь корм остается несъеденным. порции уменьшают, чтобы избежать
развития грибов и плесени. Взрослых червей удаляют из почвы на 28-й день теста.
8.4 Выбор тестируемых концентраций
Имеющаяся информация о токсичности тестируемого вещества (например, данные острой
токсичности[4]и/илиданныепредварительного диапазонноготеста)помогаютвыбору
соответствующих тестируемых концентраций. При необходимости, проводят диапазонный тест,
например, с концентрациями 0.1; 1.0; 10. 100 и 1000 мг/кг сухой массы почвы. Достаточно одной
повторности на каждую концентрацию и контроль. Продолжительность этого теста - 2 недели и к
концу этого срока оценивают смертность червей.
8.5 Проект эксперимента
8.5.1 Так как однократная суммарная статистика не может быть рекомендована для данного теста,
этот стандарт обеспечивает определение NOEC и ЕС,- NOEC вероятно будет требоваться
регулирующими органами в предсказуемом будущем. Более широко распространено использование ЕС,,
вытекающее из статистических и экологических предпосылок. Поэтому предлагаются три варианта,
основанные на рекомендациях кольцевого репродукционного теста для червей энхитраид [17].
8.5.2 При определении диапазона концентраций следует иметь в виду:
- для определения NOEC требуется не менее ляти/двенадцати концентраций в геометрической
серии. Рекомендуется четыре повторности для каждой концентрации плюс восемь контролей.
Концентрационный фактор в серии концентраций не должен превышать 2.0;
- для определения ЕС, (например. ЕСю, ЕСзо) рекомендуется адекватное количество
концентраций, вызывающих не менее четырех статистически значимых откликов на эти
концентрации;
- при комбинированном подходе, позволяющем определять как NOEC, так и ЕС,, следует
использовать восемь концентраций в геометрической серии. Концентрационный фактор - не более 1.8.
8.6 Продолжительность теста и измерения
8.6.1 На 28-й день живых взрослых червей осматривают и подсчитывают. Любое необычное
поведение (например, неспособность закапываться в почву, обездвиженность) и особенности
морфологии (например, открытые раны) регистрируют. Перенос почвы с червями на чистый лоток
помогает поиску взрослых червей. Черви из почвы должны быть хорошо промыты деионизированной
водой, а избыток воды удаляют, помещая червей на фильтровальную бумагу. Не обнаруженные
черви регистрируются как умершие, так как предполагается, что такие черви умерли и разложились
до конца теста.
8.6.2 Почву, удаленную из сосудов, помещают в них снова, но уже без удаленных взрослых
червей. Далее почву инкубируют еще четыре недели при тех же условиях, за исключением
кормления, которое производят только один раз в начале этой фазы теста (см. 7.3.3).
8.6.3 К концу 4-х недельного периода количество ювенильных червей, вылупившихся из коконов,
и количество коконов подсчитывают с использованием процедуры, изложенной в Приложении 5. Все
признаки вреда или ущерба, нанесенного червям в тестовый период, следует зарегистрировать.
8.7 Предельная концентрация теста
Если не наблюдается эффекта при наивысшей концентрации предварительного диапазонного
теста (1000 мг/кг), то репродукционный тест следует представить как пороговый тест с концентрацией
5