ГОСТ 33039—2014
2 часовдо проведения теста. Желательно, чтобы пчелы были отлучены от пищи до обработки, для того
чтобы содержимое кишечника всех пчел былоодинаковым на момент начала теста. Умирающие пчелы
не годны к использованию и должны быть заменены на здоровых до начала опыта.
7Процедура теста
7.1 Тестируемая и контрольная группы
7.1.1 Количество доз и повторностей должны удовлетворять статистическим требованиям для
определений LDS0с 95 %-ным доверительным интервалом. Обычнодля теста требуются 5 концентра
ций. представляющих геометрическую прогрессию с множителем, не превышающим 2.2 и охватываю
щим возможныйдиапазонLD50.Однако разбавление иколичество используемыхконцентрацийзависят
от наклона кривой токсичности (доза — смертность) и требований статистического метода, выбранного
для оценки результатов теста. Предварительный тест позволяет выбратьсоответствующие концентра
ции для последующих дозировок.
7.1.2 Для тестированиядействия каждой выбраннойдозировкитребуется не менее3 испытуемых
групп пчел по 10 особей в каждой.
7.1.3 Кроме группстестируемым веществом, необходимы, как минимум, триконтрольные группы,
каждая по 10 пчел. В контрольные группы должно быть включено и тестирование действия используе
мых дополнительных растворителей.
7.2 Токсичное вещество сравнения
Токсичное веществосравнениядолжнобытьвключено всерии испытаний. Для перекрытияожида
емого диапазона LD50 следует использовать не менее 3 доз вещества сравнения, а для каждой дозы
выборка должна состоять, как минимум, из 3 клеток (повторностей) с 10 пчелами. Предпочтительнее
использовать диметоат. для которого известна острая контактная токсичность:
LDS0(24 часа)=0,10—0.30 мкг/пчела[7]. Однакомогут использоватьсяидругиетоксичныедляпчел
вещества, если для них имеется достаточно проверенных данных (например, паратион).
7.3 Нанесоние тестируемого вещества
Анестезированных пчел обрабатывают индивидуально путем местного нанесения испытуемого
вещества. Пчел для нанесения тестируемыхдоз идля контролейотбираютслучайным образом. Объем 1
мкл раствора, содержащего тестируемое вещество в соответствующей концентрации, должен быть
нанесенмикроаппликатором на верхнюючасть грудной области каждой пчелы. Другиеобъемы тестиру
емого веществатакже могут быть использованы, еслиэтонеобходимо. Посленанесения вещества пчел
помещают в клетку и обеспечивают раствором сахарозы.
7.4 Условия теста
Пчелы должны содержаться в экспериментальной комнате в темноте при температуре 25
1
2 вС.
Относительную влажность необходимо поддерживатьоколо 50—70 % и регистрировать на протяжении
всего теста.
7.5 Продолжительность теста
Продолжительность опыта — 48 ч. Если смертность продолжает возрастать более чем на 10 %
между 24 и 48часами, опыт нужнопродлить максимальнодо96 чпри условии, чтосмертностьна контро
ле менее 10 %.
7.6 Наблюдения
Смертностьучитываютспустя 4 чпосле начала теста идалее через 24 ичерез48 ч. Еслиопыт про
должают дольше, тодополнительные учеты проводят с 24-часовым интервалом до 96 ч максимум, при
условии, чтосмертность вконтрольнойгруппенепревышает 10%. Все аномальныеповеденческие про
явления пчел в ходе опыта должны регистрироваться.
7.7 Пороговый тест
В некоторых случаях (например, если ожидаемая токсичность вещества низкая) может потребо
ваться пороговый тест с использованием 100 мкг д.в./пчелу, чтобы показать, что LD50 больше этой кон
центрации. Он проводится по аналогичной схеме — с использованием трех репликатов для
з