ГО СТ 32632— 2014
D.3.1 Этапы синхронизации:
- готовят чашки Петри со споем субстрата высотой 0,5 см:
- для откладывания яиц переносят 150— 200 взрослых Я. timetana и 50— 100 взрослых Я. Candida из 15—20
лучших емкостей с основной культурой с четырех-восьминедельным субстратом в емкости для культивирования и
добавляют 15 мг пекарских дрожжей. Следует избегать переноса личинок совместно со взрослыми коллемболами,
так как присутствие личинок может ингибировать откладывание яиц;
- культуру коллембол содержат при температуре 20 ± 1 аС(средняятемпературадолжнасоставлять20 *С)и
освещении в последоватепьности — 12 ч свет, 12 ч темнота (400—800 лк). Необходимо обеспечить свежий корм и
достаточную влажность воздуха, недостаток корма может привести к росту грибка на яйцах вследствие дефекации
или поеданию яиц (Я. Candida);
- по прошествии 10 дней яйца тщательно собираютс помощью иглы и шпателя и переносят на фильтроваль
ную бумагу (небольшие кусочки фильтровальной бумаги, погруженные в суспензию субстрата), которую помещают
в контейнер со свежим субстратом. Несколько зерен дрожжей добавляют в субстрат для привлечения личинок так.
чтобы они смогли оторваться от бумаги. Важно, чтобы фильтровальная бумага и субстрат были влажными, в
про тивном случае яйца будут обезвожены. В альтернативном случае, взрослые коллемболы могут удаляться из
емкос тей для культивирования после производства яиц на 2-ой или 3-ий день;
- через 3дня большая часть яиц, помещенных на бумагу, вылупляется, и некоторые личинки могут быть обна
ружены под бумагой:
- для получения личинок одного возраста фильтровальную бумагу с невылупившимися яйцами удаляют из
чашки Петри с помощью щипцов. Личинки, находящиеся в возрасте 0—3 дня. помещают в другую емкость, в качес тве
корма используют пекарские дрожжи, невылупившиеся яйца удаляют;
- яйца и вылупившиеся личинки культивируют таким же образом, как и взрослых коллембол.Вчастности, для
Я. fimelaria должны быть приняты следующие меры — обеспечение свежего корма, удаление старого заплесневе
лого корма. По прошествии одной недели личинок помещают в новые чашки Петри, обеспечивая плотность
выше 200.
D.3.2 Обработка коллембол в начале тестирования:
- Я. Candida в возрасте 9— 12 дней или Я. fimetana в возрасте 23—26 дней собирают, например с помощью
устройства для всасывания, и помещают в небольшой контейнер с влажным субстратом. Физическое состояние
коллембол проверяют под бинокулярным микроскопом (травмированных и поврежденных коллембол удаляют).
Все процедуры необходимо проводить, поддерживая коллембол во влажной атмосфере для того, чтобы избежать
высыхания, например используя влажные поверхности и пр.;
- коллембол перемещают втестовые контейнеры.Для этого контейнер переворачивают и аккуратно постуки
вают по нему для того, чтобы все коллемболы были перемешены а тестовый контейнер. Статическое электричест
во должно быть нейтрализовано, иначе коллемболы могут зависнуть в воздухе или не попасть в контейнер. Для
нейтрализации необходимо использовать ионизатор или влажную ткань, покрывающую контейнер;
- корм необходимо размещать равномерно по всей поверхности тестируемой почвы;
- во время транспортировки и тестового периода следует избегать ударов и иного физического воздействия
на тестовые контейнеры, так как это может увеличить уплотнение почвы и препятствовать взаимодействию между
коллемболами.
0.4 Альтернативные виды коллембол
Для тестирования также могут использоваться другие виды коллембол такие, как Proisotoma minute, tsotoma
vlndis. Isotoma anghcana. Orchesella ctncta, Sinetla curviseta, Paronychiurus klml, Orthonychiurus folaoml, Mesaphorura
macrochaeta. Прежде, чем использовать альтернативные виды, необходимо выполнить ряд требований:
- виды должны быть однозначно идентифицированы.
- в отчете о проведении теста необходимо приводить обоснование выбора вида;
- репродуктивная стадия коллембол должна входить в период тестирования, поскольку репродуктивная ста
дия является одним из объектов тестирования;
- должна быть известна информация о выращивании видов — возраст созревания, продолжительность раз
вития яиц.возраст тестирования;
- тестовый субстрат и корм должны обеспечивать оптимальные условия для роста и размножения кол
лембол;
- изменчивость должна быть достаточно низкой для точной и достоверной оценки токсичности.
12