ГОСТ 32632—2014
Приложение О
(рекомендуемое)
Выращивание и синхронизация F.
fimetaria
и F.
Candida
D.1 Параметры синхронизации, указанные а настоящем приложении, необходимо подтверждать для каждо
го конкретного штамма коллембол. гарантируя, что используемая длительность синхронизации позволит получить
достаточно синхронизированных личинок. В общем случае, подходящее время для сбора яиц и синхронизирован
ных личинок определяется временем откладывания яиц после перемещения взрослых особей в свежий субстрат и
периодом инкубации яиц.
Для выращивания и синхронизации новой культуры коллембол рекомендуется иметь постоянную основную
культуру, размещенную примерно в 50 чашках Петри. Основную культуру необходимо поддерживать в хороших
питательных условиях за счет еженедельного кормления, полива и удаления продуктов жизнедеятельности. Вне
сение слишком малого количества особей коллемболы в субстрат может привести к ингибированию роста культуры за
счет роста грибков.
Если основная культура используется для получения яиц слишком часто, то это может привести к утомлению
культуры. Признаком утомления является появление мертвых взрослых особей и плесени на субстрате. Оставшие ся
яйца от производства синхронных коллембол могут использоваться для омоложения культуры.
В синхронной культуре F. fimetaria мужские особи отличаются от женских в первую очередь по размеру.
Мужские особи очевидно меньшеженских, и скорость передвижения самцов значительно больше. Для правильного
отбора мужской или женской особи требуется практика, отбор может быть подтвержден микроскопическим осмот
ром половых органов.
D.2 Выращивание коллембол
D.2.1 Подготовка субстрата для культивирования
В качестве субстрата для культивирования используется гипс (сульфат кальция) с добавлением активного
угля. Данный субстрат обеспечивает достаточную влажность, а уголь выполняет функцию поглотителя отходящих
газов и продуктов жизнедеятельности. Для облегчения наблюдений за коллемболами может использоваться уголь
различной формы. Для F. Candida и F. fimetaria используется измельченный уголь (черный или серый гипс).
Субстрат состоит из:
- 20 мл активного угля;
- 200 мл дистиллированной воды;
- 200 мл гипса;
или
- 50 г измельченного активного угля;
- 260—300 мл дистиллированной воды;
- 400 г гипса.
Готовят суспензию гипса и активного угля в дистиллированной воде, перед использованием отстаивают.
D.2.2 Культивирование
Коллембол содержат влабораторных емкостях таких, как чашки Петри (90 мм * 13 мм), на 0,5см заполненных
субстратом. Культивирование проводят при 20 ± 1 ‘ С и освещении в последовательности— 12чсвет,12чтемнота
(400— 800 лк). В емкостях поддерживается постоянная влажность таким образом, чтобы относительная влажность
воздуха внутри емкости составляла 100 %. Такая влажность может достигаться за счет присутствия свободной
воды в порах гипса, при этом следует избегать появления водяной пленки на поверхности гипса.
Потери воды могут быть компенсированы за счет пропускания влажного воздуха. Погибших коллембол. а так
же заплесневелый корм, необходимо удалять из емкостей для культивирования. Для стимулирования откладыва
ния яиц взрослые коллемболы необходимо переносить в чашки Петри со свежим субстратом.
D.2.3 Кормление
В качестве корма для F.
Candida
и F.
fimetaria
используют гранулированные сушеные лекарские дрожжи.
Свежий корм добавляют в емкости для культивирования один или два раза в неделю, не допуская его заллесневе-
ние. Корм помещают непосредственно на субстрат небольшими порциями. Количество добавляемых дрожжей
должно быть скорректировано в зависимости от численности популяции коллембол. но. как правило, достаточно
2—15 мг.
О.З Синхронизация коллембол
Тестирование необходимо проводить с синхронизированными коллемболами. Кроме того, синхронизация
позволяет провести дискриминацию мужских и женских особей F. fimetaria в возрасте от 3 недель идалее на основе
половогодиморфизма, то есть различия вразмерах. Описанная ниже процедура является руководством по получе
нию синхронизированных коллембол (практические шаги не являются обязательными).
11