ГОСТ 28424-2014
7.1.1.4 Столик нагревательный.
7.1.1.5 Сифон или фильтр для отбора промывной среды.
7.1.1.6 Чашки Петри диаметром 90 и 35мм для поиска и сбора эмбрионов.
7.1.1.7 Флаконы вместимостью 450 - 500 см3.
7.1.1.8 Пипетки для отлова эмбрионов.
7.1.1.9 Среда фосфатно-буферная, содержащая альбумин сыворотки крови крупного рогатого
скота (BSA) концентрацией 4 г/дм3 или фетальную сыворотку крови крупного рогатого скота (FCS)
концентрацией 20 см3/дм3 и антимикробный препарат (гентамицин концентрацией 0,05 г/дм3 или
полиген концентрацией 0.3 г/дм3).
7.1.1.10 Трипсин, раствор массовой долей 0,25 %.
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками, а также
материалов и сред по качеству не ниже вышеуказанных.
7.1.2 Подготовка к испытанию
Раствор, полученный с соблюдением правил асептики в отдельный флакон после вымывания
эмбрионов из каждого рога матки самки-донора, выдерживают при температуре от 18 X до 25 °С в
течение 20 мин или в термостате при температуре 37 X в течение 20 мин для осаждения эмбрионов.
Верхнюю часть раствора удаляют с помощью сифона, оставляя 80 - 100 см3раствора. Оставшийся
раствор переносят в две-три чашки Петри диаметром 90 мм.
Прииспользованиипромывочнойсистемысфильтромотфильтрованныйраствор
просматривают непосредственно в прилагаемой к системе емкости для сбора эмбрионов.
7.1.3 Проведение испытания
Эмбрионы просматривают под бинокулярной лупой при увеличении 20х- 28х.
Эмбрионы с оценкой «непригодные» удаляют.
Эмбрионы, пригодные к пересадке и замораживанию и отобранные в чашки Петри диаметром
35 мм со средой по 7.1.1.9, не менее десяти раз переносят для промывки в чистую фосфатно
буферную среду, используя при каждом переносе эмбрионов новую пипетку. Допускается групповая
промывка эмбрионов, взятых у одной самки-донора, но их число не должно превышать десяти в
каждой промывке.
В случае, когда требуется проведение операций по инактивации или удалению вирусов
(например, герлесвирус-1 крупного рогатого скота, вирус болезни Ауоски), проводят дополнительную
промывку 0.25 %-ным раствором трипсина.
После промывки зону пеллюцида каждого эмбриона исследуют по всей поверхности при
увеличении 50х - 100х для признания ее неповрежденной и не имеющей никаких посторонних
включений.
7.1.4 Обработка результатов
Оценку качества эмбрионов по морфологическим показателям проводят на соответствие
требованиям, указанным в 4.4.
Свежеполученные эмбрионы с оценкой «отличные и хорошие» подлежат прямой пересадке
животным-реципиеитам или замораживанию.
Свежеполученные эмбрионы с оценкой «удовлетворительные»,«условно пригодные»
пересаживают животным-рецилиентам.
Замороженные эмбрионы, получившие после оттаивания оценку «отличные и хорошие»,
«удовлетворительные» и «условно пригодные», пересаживают животным-реципиентам.
Эмбрионы с оценкой «непригодные» выбраковывают.
7.2 Определение санитарного состояния эмбрионов
7.2.1 Санитарное состояние определяют у свежеполученных эмбрионов, подлежащих пересадке
или замораживанию.
7.2.2 Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов, а также эмбрионов, подлежащих
замораживанию, устанавливают на основании выборочного микробиологического исследования
предпоследнего промывочного раствора соответствующей среды, не менее чем от шести партий
эмбрионов в один квартал.
7.2.3 Для определения санитарного состояния эмбрионов отбирают по 2 см3соответствующей
среды - 1 см3 среды используют для микробиологических исследований, 1 см3 среды помещают в
пробирку, плотно закрывают, маркируют и хранят в замороженном виде до использования всех
эмбрионов данной партии.
7.2.5 Контроль стерильности сред проводят по ГОСТ 28085.
8