ГОСТ Р ИСО 13366-1—2010
В случаеболее длительного хранения в пробы добавляют химические консерванты, такие какборная
кислота, бронолол илидихромат калия. Массовая концентрация борной кислоты в анализируемой пробе не
должна превышать 0.6 г на 100 см3. Массовая концентрация бронопола в анализируемой пробе недолжна
превышать 0.05 г на 100 см3. Массовая концентрация дихромата калия в анализируемой пробе недолжна
превышать 0.1 г на 100 см3.
Консервированные пробы хранят при температуре (4 ± 2)
°С
не более 6 дней.
Рекомендуется ограничить использование дихромата калия в случае проб, для которых предусмот
рен толькодлительный срокхранения.
7.2 Приготовление пробы
Анализируемую пробу молока нагревают (см. 7.1) на водяной бане (5.1) при температуре 40 °С. по
стоянно перемешивая. Охлаждают пробу до температуры 20 “С.
Разбавляют анализируемую пробу фосфатно-буферным раствором (4.2) до получения около
500 000 соматических клеток/см3для каждой разбавленной анализируемой пробы.
у
,
d ^
V. х
Vb’
(
1
)
где
d
— коэффициент разбавления для получения надлежащего количества соматических клеток в анали
зируемой пробе, примерно 500 000 клеток/см3:
V, — объем, см3,анализируемой пробы;
Vb
— объем, см3,буферного раствора, используемогодля разбавления анализируемой пробы.
Записывают надлежащий коэффициент разбавления,
d,
объем анализируемой пробы
Vt,
и объем
буферного раствора
Vb,
используемый для получения нужного разбавления.
8 Проведение определения
Для каждой анализируемой пробы приготовляют, как минимум, два мазка (см. 8.1) и отбирают лучший
из них (например, мазок, не поврежденный в процессе окрашивания). Погружают предметные стекла (5.6)
в этанол (95 % по объему). Стерилизуют пламенем и охлаждают.
8.1 Приготовление мазка и окрашивания
Для приготовления мазка и окрашивания следуют рекомендациям, приведенным в8.1.1 или 8.1.2.
П р и м е ч а н и е — Окрашивание в случав козьего молока описано в приложении В.
8.1.1 Приготовление мазка и окрашивания с использованием окрашивающего раствора
Используя микрошприц (5.4), отбирают 0.01 см3анализируемой пробы (при необходимости разбав
ленной) (см. 7.2). Микрошприц промывают анализируемой пробой. При необходимости тщательно и акку
ратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.
Помещают смесь на чистое предметное стекло площадью 1 см2(5.6). Используя иглу, равномерно
распределяют анализируемую пробу на всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы пло
щадь. прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают при ком
натной температуре до состояния полной сухости.
Высушенный на предметном стекле мазок погружают в модифицированный окрашивающий раствор
(4.1.1) втечение не менее 15 мин. Высушивают мазок при комнатной температуре.
Затем осторожно вносят мазок под водопроводную воду до полного смыва всех излишков красите
ля. Высушивают вновь и хранят в условиях защиты от пыли.
Срок хранения предметных стекол с мазками — не более 12 мес.
8.1.2 Окрашивание с использованием окрашивающего раствора бромистого этидия и приго
товление мазка
Смешивают 1 см3приготовленной анализируемой пробы (см. 7.2) с 1см3рабочего окрашивающего
раствора бромистого этадия (4.1.2.3) в пробирке. Смесь хранят в защищенном от света месте. Нагревают
пробирку на водяной бане (5.1) при температуре 50 °С в течение 3 мин. Охлаждают до комнатной темпера
туры.
Используя микрошприц (5.4). отбирают 0,01 см3смеси. Микрошприц промывают смесью. При необ
ходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала со
смесью.
Помещают смесь на чистое предметное стекло площадью 1 см2(5.6). Используя иглу, равномерно
распределяют смесь на всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы площадь, прилегаю-
4