ГОСТ 28417-89 С. 3
Ширины вместимостью 5 см3.
Иглы инъекционные по ГОСТ 25377*.
Морские свинки массой 350—400 г.
2.5.2. Проведение испытания
Для испытания используют смесь вакцины, взятую в равных объемах из 3 отобранных флако
нов. Препарат вволят подкожно 5 морским свинкам в дозе 5 см - в область брюшных мышц в два
места (по 2.5 см3).
2.5.3. Оценка результатов
Вакцина не должна вызывать заболевания и гибель животных втечение 10 сут наблюдения. На
месте введения препарата допускается образование ограниченной припухлости, исчезающей через
2—3 сут.
2.6.Определение биологической активности
Сущность метода заключается в определении количества антитоксических антител в сыворотке
крови вакцинированных овен.
2.6.1. Аппаратура и материалы
Термостат с температурой нагрева (37 ± 0,5) *С.
Весы лабораторные с погрешностью взвешивания 0,0001 г.
Флаконы стеклянные вместимостью 100 см3 по ТУ 64—2—100.
Пипетки мерные вместимостью I, 5 и 10 см’ по НТД.
Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.
Шприцы вместимостью 1 и 5 см3 по ГОСТ 22967.
Пробирки лабораторные по ГОСТ 25336.
Токсины сухие Клострндиум перфрингенс типов С и I).
Раствор физиологический с pH 7,2—7,4.
Овны взрослые массой не менее 30 кг.
Белые мыши массой 16—18 г.
2.6.2. Подготовка к испытанию
Для испытания биологической активности используют общую пробу вакцины, взятую в равных
объемах из 10 флаконов.
2.6.3. Проведение испытания
2.6.3.1. Получение объединенной пробы сывороток крови вакцинированных овец
5 овнам массой не менее 30 кг. в сыворотке крови которых не содержится специфических
антител к Клострндиум перфрингенс или их уровень не превышает 0,04 АЕ/см3, вводят вакцину
дважды подкожно в бесшерстную область за локтевым суставом в дозе 4 см5с интервалом 18—20 сут.
Через 18—20 сут после второй вакцинации от каждого животного берут кровь.
Готовят объединенную пробу полученных сывороток, смешанных в равных объемах.
2.6.3.2. Определение минимальной летальной дозы типовых токсинов
Для определения минимальной летальной дозы (ДЛМ) типовых токсинов делают навески
каждого токсина по 100 мг, которые растворяют в 100 см ’ физиологического раствора с pH 7,2—7,4.
Основное разведение содержит I мг токсина в I см3раствора. Из него готовят последовательные
разведения: 1:10, 1:15, 1:20 и т. д. до предполагаемого титра, пользуясь при этом разными пипетками.
Каждое разведение токсинов вволят внутривенно по 0.5 см3 2 белым мышам массой 16—18 г.
Результаты учитывают через 48 ч. За титр токсина принимают то его разведение, при введении
которого еще наблюдается гибель мышей.
Например. Мыши пали от разведения 1:20. а после разведения 1:25 остались живы. Следова
тельно. 1 мг сухого токсина содержит 40 ДЛМ для мышей массой 16—18 г.
2.6.3.3. Постановка реакции нейтрализации типовых токсинов объединенной пробой сыворот
ки крови вакцинированных овей
Готовят разведения типовых токсинов, содержащие 12 ДЛ М/см3. Испытуемую сыворотку овец
разводят 1:4, 1 см3которой смешивают с 1см3 разведенного токсина, и смесь выдерживают 30 мин
при температуре 37 *С—38 "С. Затем смесь сыворотки и токсина по 0,5 см’ вводят внутривенно 4
белым мышам. Одновременно ставят контроля токсинов. Для этого готовят разведения, содержа щие
0,5; 1.0 и 2.0 ДЛМ в объеме 0,5 см3. Каждое разведение вводят внутривенно 2 белым мышам в объеме
0,5 см3. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч.
На территории Российской Федерации действует ГОСТ 25377—82.