ГОСТ 25М1—12 Стр 3
капле разведений гемолизина, по одной капле 10%-ного раство
ра комплемента и по одной капле суспензии эритроцитов барана.
Результаты учитывают через 20 мни инкубации при температуре
37°С. В работе используют две единицы гемолизина.
2.2.3.Титрование комплемента проводят следующим образом:
10%-ный раствор комплемента вносят в пробирки по 0,1; 0,2; 0,3;
0,4; 0,5 и 0.6 см8.Указанное количество комплемента доводят
физиологическим раствором хлористого натрия до объема 1,0 см*.
После этого в лунки пластины для микротитрования вносят по
две капли физиологического раствора, добавляют по одной капле
различных разведений комплемента и по две капли гемолитичес
кой системы (смеси гемолизина и эритроцитов, инкубированной
в течение 20 мин при комнатной температуре).
Смесь инкубируют в термостате в течение 20 мин при темпе
ратуре 37*С и учитывают реакцию. За титр комплемента прини
мают наибольшее разведение его, которое дает полный гемолиз
эритроцитов. В основном опыте используют полторы дозы ком
племента.
23. Проведение и с с л е д о в а н и я
2.3.1. Сыворотки в разведении 1:5 вносят но одной капле в
две первые лунки двух рядов пластин для мнкротитрования и
готовят разведения or 1:10 до 1:160 на физиологическом раст
воре.
Для контроля готовят аналогичные разведения положитель
ной и отрицательной сывороток.
В один ряд лунок добавляют по одной капле специфического
антигена в рабочем разведении, во второй — по одной капле кон
трольного антигена или физиологического раствора, затем в каж
дую лунку добавляют комплемент в рабочем разведении.
Пластины выдерживают в холодильнике в течение 18 ч при
температуре 4—8аС или в термостате в течение 1 ч при темпе
ратуре 37°С. Затем в каждую лунку вносят по две капли гемоли
тической системы и выдерживают в водяной бане в течение 20—
30 мни при температуре 37°С.
2.4. Об р а б о т к а р е з у л ь т а т о в
2.4.1. Отсутствие лизиса эритроцитов означает полное (четы
ре плюса) связывание, т. е. положительную реакцию, а полный
их лизис —отсутствие связывания комплемента, т. е. отрицатель
ную реакцию. Титром исследуемой сыворотки крови считают то
наибольшее ее разведение, которое вызывало связывание ком
племента (три или четыре плюса).
Результаты исследований на хламнднозный аборт овец счита
ют положительными при титре сыворотки 1:10.