ГОСТ 33871—2016
4.3 Подготовка к исследованию
4.3.1 Приготовление растворов антикоагулянтов
4.3.1.1 Приготовление раствора лимоннокислого натрия
Для приготовления 200 см3раствора 5 г натрия лимоннокислого 3-замещенного вносят в мерную
колбу и доводят объем раствора 0.9 %-ным изотоническим раствором хлорида натрия до 200 см3.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 "С не более 1 мес.
4.3.1.2 Приготовление раствора Альсевера
В мерной колбе растворяют 24.6 г глюкозы. 9.6 г натрия лимоннокислого 3-замещенного и 5.04 г
натрия хлористого в 1.2 дм3 дистиллированной воды.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С не более 3 мес.
4.3.2 Приготовление 0.9 %-ного изотонического раствора хлорида натрия
В мерной колбе растворяют 9 г хлорида натрия, доводя объем раствора водой для инъекций до
1дм3. Раствор фильтруют, разливают в стеклянные (полимерные) флаконы по 100 и250 см3 истерили
зуютпри температуре 110 °С — 120 °Св течение 15—20 минили текучим паром притемпературе 100 °С
в течение 30 мин. pH раствора после стерилизации от 5.0 до 7.0 ед. pH.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С не более 1 года.
4.3.3 Приготовление 1 %-ной суспензии эритроцитов
4.3.3.1 Забор крови
Кровь берут, соблюдая правила антисептики у здоровых животных из благополучных по инфекци
онным болезням пунктов выращивания. Кровьберутшприцами однократногоили многократногоприме
нения из сердца взрослых лабораторных животных, из яремной вены у крупных животных, из
подкрыльцовой вены петухов. Кровь переносят в пробирки с антикоагулянтами. Кровь можно брать в
вакуумные пробирки с антикоагулянтом.
Антикоагулянты добавляют в пробирку (или шприц) перед взятием крови из расчета: раствора
лимоннокислого натрия и крови— в соотношении 1:2; раствор Альсевера и крови — в соотношении 1:1
соответственно.
Гепарин используют из расчета 0,2 см3жидкого гепарина (с активностью 5 тыс. ЕД/см3) или 0.2 мг
сухого гепарина на 100 см3крови.
Эритроциты с растворамиантикоагулянтовможнохранить притемпературеот 2 °Сдо4 X до появ
ления признаков гемолиза.
4.3.3.2 Приготовление суспензии эритроцитов
Дляполучениясуспензииэритроцитов ихза2—4ч до использованияотмывают0.9 %-ным изотони
ческим раствором хлорида натрия. Обработку повторяют 3—4 раза, каждый раз осаждая эритроциты
центрифугированием по 10 мин при 1.5—2 тыс. об/мин. После последнего отмывания надосадочная
жидкость должна быть бесцветной и прозрачной. Из осадка эритроцитов, который принимают за 100
%-ную суспензию, готовят суспензию соответствующей концентрации (чаще 1%-ной) на 0.9 %-ном
изотоническом растворе хлорида натрия.
Для получения 1%-ной суспензии смешиваютоднучасть(пообъему)осадка эритроцитовс99час
тями 0,9 %-ного изотонического раствора хлорида натрия.
Концентрация суспензии эритроцитов зависит от вируса, с которым ставится реакция.
Хранят приготовленную суспензию эритроцитов притемпературеот2 вСдо 8 DCдо появления при
знаков гемолиза эритроцитов.
4.4 Проведение исследования
В лунки планшета для иммунологических реакций вносят по 0,25 мм30.9 %-ного изотонического
раствора хлорида натрия и готовятдвукратные разведения вакцины (вируса), начиная с 1:2до 1:4096 и
более. Для этого в первую лунку автоматическим дозатором вносят 0,25 мм3вакцины (вируса), трижды
перемешивают с помощью пипетки и переносят 0.25 мм3во вторую лунку и так далее до необходимого
разведения. Из последнейлункиудаляют0,25 мм3раствора в антисептический раствор. В каждую лунку
добавляют 0.25 мм3суспензии эритроцитов. Одновременно ставят контроль эритроцитов на спонтан
нуюагглютинацию. Для этоговчетырелункивносят0,25мм30.9 %-ногоизотоническогораствора хлори
да натрия и 0,25 мм3 суспензии эритроцитов. Планшет осторожно встряхивают и выдерживают при
комнатной температуре в течение 1—2 ч.
4.5 Учет результатов
Учет результатов проводят, если во всехлунках, использованныхдля контроляспонтанной агглю
тинации. эритроциты осели в виде «пуговки».
з