ГОСТ 31772—2012
6.23 Стандарт мутности 1.0 по MacFarland или стандартный образец мутности бактерийных
взвесей БАК-10 с аттестованным значением оптической плотности (0,36 ± 0.01) ед. оптической плот
ности.
6.24 Вспомогательное оборудование для проведения микробиологических исследований, изме
рительное оборудование итесты для контроля качества проведения микробиологических исследований
поГОСТ ISO 7218.
Допускается использованиедругих средств измерений, вспомогательного оборудования по метро
логическим. техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.
Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.
7 Подготовка к испытаниям
7.1 Приготовление 70 %-ного водного раствора этилового спирта
В цилиндр вместимостью 1000 см3по ГОСТ 1770 вносят 730 см3этилового спирта по ГОСТ 5962 и
доводят объем дистиллированной водой по ГОСТ 6709 до 1000 см3.
7.2 Приготовление водно-спиртового экстракта прополиса
В колбу вместимостью 250 см3по ГОСТ 25336 вносят навеску прополиса (5.0 ±0.5) г и 100 см3
70 %-ного водного раствора этилового спирта, приготовленного по 7.1, закрывают корковой пробкой и
экстрагируют на аппарате для встряхивания по 6.8 при комнатной температуре в течение (24 ± 1) ч. Со
держимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр по 6.16. Экстракт прополиса (ЭП) хра
нят в темном месте при температуре не выше 25 °С.
7.3 Подготовка к микробиологическим исследованиям
Подготовку стерильной посуды и материалов, контроль работы испытательного оборудования,
приготовление питательных сред и обеззараживание посевов тест-культуры проводят в соответствии с
ГОСТ ISO 7218 и инструкциями производителей.
7.4 Приготовление тест-культуры
Культуру Staphylococcus aureus no 6.22 выращивают в течение (24 ♦2) ч на питательном агаре (см.
6.19) при температуре (36 ± 1) °С. Вфизиологическом растворе поГОСТ 10444.1 готовят суспензию кле
ток S. aureus, соответствующую 103 клеток/см3 по стандарту мутности (см. 6.23). Из исходной суспензии
тремя 10-кратными разведениями в физиологическом растворе получают взвесь тест-культуры плот
ностью 106клеток/см3.
8 Проведение испытания
8.1 Круглодоннуюколбу вместимостью 10см3по ГОСТ 25336 взвешивают с записью результатадо
третьегодесятичного знака, пипеткой вместимостью 5 см3по ГОСТ 29227 вносят 4 см3ЭП. приготовлен
ного по 7.2. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при (45 ♦ 2) °С до постоянного веса (раз
ность между двумя последовательными взвешиваниями не превышает 0.001 г). Массу сухого экстракта
рассчитывают как разность веса колбы с сухим экстрактом и пустой колбы.
8.2 В стерильные пробирки П2-21-200 по ГОСТ 25336 стерильным цилиндром вместимостью
10 см3по ГОСТ 1770 наливают по 10 см3расплавленного агара Мюллера-Хинтона (МХА), приготовлен
ного по 7.3, и выдерживают на водяной бане по 6.10 при (52 ± 2) °С для выравнивания
температуры. В МХА дозатором по 6.4 вносят ЭП в объеме 0.02; 0,04; 0,06; .... 0.20 см3,
перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 6.14.
В чашки с застывшей средой, содержащей ЭП. вносят по 0,1 см3взвеси тест-культуры S. aureus,
приготовленной по 7.3, и равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем по
6.15. Для контроля ростовых качеств среды и жизнеспособности тест-культуры производят посев на
МХА без добавления ЭП; для проверки отсутствия подавления растворителем роста тест-культуры про
изводят посев на МХА с добавлением 70 %-ного водного раствора этилового спирта в объеме, равном
максимальному добавленному объему ЭП. Чашки с засеянной средой культивируют при (36 ± 1) °С и
через (24
а
1) ч учитывают наличие роста.
8.3 В случае, если рост тест-культуры наблюдается при всех концентрациях ЭП и значение МПК
определить неудается, испытание по 8.2 повторяют, увеличивая количество вносимого в среду экстрак
та, но не более чем до 0.3 см3.
3