ГОСТ Р 53124—2008
Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками,
вспомогательногооборудования иматериалов с характеристиками, реактивов по качествуи чистоте не
ниже вышеуказанных.
7 Подготовка к испытаниям
7.1 Приготовление 70 %-ного водного раствора этилового спирта
В цилиндр вместимостью 1000 см3по ГОСТ 1770 вносят730см3этиловогоспирта поГОСТР 51652
идоводятобъем дистиллированной водой по ГОСТ 6709до 1000 см3.
7.2 Приготовление водно-спиртового экстракта прополиса
В колбу вместимостью 250 см3по ГОСТ 25336 вносят навеску прополиса (5.0 * 0.5) г и 100 см3
70%-ного водного раствора этилового спирта, приготовленного по 7.1, закрывают корковой пробкой и
экстрагируют на аппарате для встряхивания по 6.8 при комнатной температуре в течение (24 i 1) ч.
Содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр по 6.16. Экстракт прополиса (ЭП)
хранят в темном месте при температуре не выше 25 X .
7.3 Подготовка к микробиологическим исследованиям
Подготовку стерильной посуды и материалов, контроль работы испытательного оборудования,
приготовление питательныхсред иобеззараживание посевов тест-культуры проводят в соответствии с
ГОСТ Р 51446 и инструкциями производителей.
7.4 Приготовление тест-культуры
Культуру Staphylococcus aureus по 6.22 выращивают в течение (24 ♦2) ч на питательном агаре
(см. 6.19)при температуре (36 ± 1)Х . Вфизиологическом растворе поГОСТ 10444.1 готовят суспензию
клетокS. aureus, соответствующую 10аклеток/см3по стандарту мутности (см. 6.23). Из исходной суспен
зии тремя 10-кратными разведениями в физиологическом растворе получают взвесь тест-культуры
плотностью 106клеток/см3.
8 Проведение испытания
8.1 Круглодонную колбу вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают с записью результата
до третьегодесятичного знака, пипеткой вместимостью 5 см3 по ГОСТ 29227 вносят4 см3ЭП. приготов
ленного по7.2. Растворительотгоняют на роторном испарителепри(45 ± 2)X до постоянноговеса (раз
ность междудвумя последовательными взвешиваниями не превышает0.001 г). Массу сухого экстракта
рассчитывают как разность веса колбы с сухим экстрактом ипустой колбы.
8.2 В стерильные пробирки П2-21-200 по ГОСТ 25336 стерильным цилиндром вместимостью
10 см3 по ГОСТ 1770 наливают по 10 см3расплавленного агара Мюллера-Хинтона (МХА), приготовлен
ного по 7.3. и выдерживают на водяной бане по 6.10 при (52 ♦.2) X для выравнивания температуры.
В МХАдозатором по6.4 вносятЭП вобъеме 0,02; 0.04; 0.06;...; 0.20см3,перемешиваютиразливаютв
сте рильные чашки Петри по6.14.
В чашки с застывшей средой, содержащей ЭП. вносят по 0.1 см3взвеси тест-культуры S. aureus,
приготовленной по 7.3. и равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем по
6.15. Для контроля ростовых качеств среды ижизнеспособности тест-культуры производят посев на
МХАбездобавления ЭП; для проверкиотсутствияподавлениярастворителем роста тест-культуры про
изводят посев на МХА с добавлением 70 %-ного водного раствора этилового спирта в объеме, равном
максимальному добавленному объему ЭП. Чашки с засеянной средой культивируют при (36 ± 1) X
и
через (24 ± 1) ч учитывают наличие роста.
8.3 В случае, если рост тест-культуры наблюдается при всех концентрациях ЭП и значение МПК
определить не удается, испытание по8.2 повторяют, увеличивая количествовносимого всредуэкстрак
та. но не более чемдо 0.3 см3.
9 Обработка и представление результатов
9.1 ЗначениеМПКпрополисав пересчетена сухойэкстракт С.мкг/см3,рассчитываютпоформуле
Ск V-10“* ■ш • 4“1•10е,(1)
где V — минимальное количество экстракта прополиса, подавляющее рост тест-культуры на среде
культивирования по8.2, см3;
10-1— объем среды культивирования, см3;
3